培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后,用經(jīng)過滅菌的工具(如接種針和吸管等)在無菌條件下接種含菌材料(如樣品、菌苔或菌懸液等)于培養(yǎng)基上,這個(gè)過程叫做無菌接種操作。 在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無菌操作。
2. 接種針冷卻
接種針滅菌后,移到酒精燈旁邊冷卻,備用。
配制好固體或液體培養(yǎng)基后,利用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌,經(jīng)過滅菌后培養(yǎng)基里無任何微生物,在超過經(jīng)工作臺內(nèi),用接種針等將目標(biāo)菌種接種到培養(yǎng)基中的過程。
劃線分離:
由接種環(huán)沾取少許待分離的材料,在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線,微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經(jīng)培養(yǎng)后,可在平板表面得到單菌落。
①取菌種:取出目標(biāo)菌種,融化后,備用;
②接種針滅菌:灼燒接種針進(jìn)行滅菌;
③接種針冷卻:將接種針移至酒精燈旁邊冷卻;
④蘸取菌種:甘油管用75%酒精消毒,待酒精揮發(fā)完全,在酒精燈火焰略微滅菌(防止烤糊),然后用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌種;
⑤劃線:取已經(jīng)備好的固體平板,邊轉(zhuǎn)動(dòng)平板邊用酒精燈火焰滅菌,打開平板(靠口朝酒精燈),用上述接種環(huán)在平板上劃線,先在一側(cè)連續(xù)劃線3-4次,邊轉(zhuǎn)動(dòng)平板邊用酒精燈灼燒接種環(huán),冷卻后,用接種環(huán)穿過第一次劃線部分繼續(xù)劃線3-4次,同樣方法進(jìn)行第三次劃線,或第四次劃線(根據(jù)菌液濃度和菌種類型確定劃線次數(shù)),灼燒接種環(huán);
⑥標(biāo)記:在平板底部邊緣處標(biāo)記菌種名稱,日期和其他信息;
涂布法接種:
先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中,然后用無菌吸管吸取0.1ml 菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無菌L 型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻,將涂抹好的平板平放于桌上20~30min,使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后將平板倒轉(zhuǎn),保溫培養(yǎng),至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。
①取菌種:取出目標(biāo)菌種平板;
②接種針滅菌:灼燒接種針進(jìn)行滅菌;
③接種針冷卻:將接種針移至酒精燈旁邊冷卻;
液體接種
將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦,使菌體分散,塞上試管塞再輕輕搖勻。
多用于增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng),也可用純培養(yǎng)菌接種液體培養(yǎng)基進(jìn)行生化試驗(yàn),其操作方法與注意事項(xiàng)與斜面接種法基本相同。
傾倒法接種:
吸取1ml 菌液加入平板中,倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板,使菌液與培養(yǎng)基混合均勻,冷疑后倒置,適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。
螺旋接種法:
可以在無任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種。對數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動(dòng)分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準(zhǔn)。菌液的濃度可以通過培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來計(jì)算。
微生物檢驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)
(1)在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作; (2)使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放; (3)在正火焰上方操作; (4)接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌; (5)在接種培養(yǎng)物時(shí),協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn); (6)不能用嘴直接吸吹吸管; (7)帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。