一般菌種臨時存放及活化
無菌培養(yǎng)
平板劃線分離法
一般操作過程
1、在無菌操作下,用無菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2、將接種好的培養(yǎng)基置于指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3、在無菌環(huán)境下,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端。滴數(shù)滴無菌水于加熱處,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。取出隔熱纖維紙和內(nèi)管,以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。
4、(a)適用于細(xì)菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL指定之液體培養(yǎng)基,滴入內(nèi)管內(nèi),并輕微震蕩(可用該吸管協(xié)助),直到均勻懸浮。(b)適用于霉菌、酵母菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL無菌水,滴入內(nèi)管內(nèi),待干燥粉末溶解后,以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi),輕微震蕩使其均勻后,靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于指定的平板培養(yǎng)基上,做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋,用無菌L型玻棒均勻涂抹,以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形,而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養(yǎng)基內(nèi),并依指定的溫度培養(yǎng)之。
6、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,遲滯期較長,必須等培養(yǎng)二倍時間后才能長出,且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)后才能正常生長。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗,才視為不能活化。
7、未開封之冷凍干燥管,請冷藏于4℃冰箱,切勿冷凍保存。