您的樣品是否含有<20 kDa的目標蛋白質(zhì)?請下載如何使用SDS-PAGE檢測合成肽的方案,其中包括考馬斯藍染色,銀染和電印跡的有效方法。
Tricine-SDS-PAGE常用于分離1-100 kDa質(zhì)量范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)。它是用于分辨小于30kDa蛋白質(zhì)的首選電泳系統(tǒng)。
通過SDS-PAGE看到小肽確實是非常困難的。 Tris-tricine凝膠會給你更好的分辨率。如果您只想檢測肽,質(zhì)譜仍然是確認肽身份的最佳方法。
小肽與較大的蛋白質(zhì)結(jié)合較少的考馬斯亮藍色。因此,較小的肽通過考馬斯染色或銀染更難以檢測。如果你真的想在凝膠上看到你的肽,你可以嘗試加載更多的樣品。除非您認為您的肽從凝膠中遷移出來,否則更換凝膠百分比不會有多大幫助。您可以增加常規(guī)17%凝膠中交聯(lián)劑的百分比。此外,與常規(guī)8.8相比,將分辨凝膠的pH值提高到9.5。另外,尿素(4-8M)的添加有助于削尖帶。
如果您要使用西方,這是一種更靈敏的檢測方法,請使用西方,而不是凝膠染色。然而,肽可以簡單地穿過膜。如果你重復實驗,試著把兩片膜片和更短的時間轉(zhuǎn)移(在200毫安時少于1小時)。 0.2um的毛孔就足夠了。你可以得到更小的毛孔,但這不應該是必要的。您可能需要按設備的建議電流密度(mA / cm2)進行半干轉(zhuǎn)印15-20分鐘。短的15分鐘轉(zhuǎn)移時間適用于大多數(shù)小肽。
如果您可以提前計劃并合成用生物素標記的對照小肽,您可以監(jiān)測轉(zhuǎn)移過程及其與鏈霉親和素綴合的HRP結(jié)合膜的能力。