自20世紀(jì)中葉以來，隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，規(guī)�；�、集約化的養(yǎng)殖使得養(yǎng)殖密度不斷加大，優(yōu)良品種的遺傳能力有了顯著的提升，但是，養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化，流通的速率不斷加快以及各種病原體的變異和抗生素的大量使用等，都造成了動物機(jī)體的基礎(chǔ)免疫壓力不斷加大，發(fā)病情況和疫情逐漸加重，疾病導(dǎo)致的損失日益增加，我國養(yǎng)殖業(yè)面臨著極大的挑戰(zhàn)。如何提高動物生產(chǎn)成績的同時增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力已是目前許多研究者關(guān)注的熱點。動物免疫力的提高，不但要選擇抗病能力強(qiáng)的品種，營養(yǎng)水平是調(diào)節(jié)免疫力的基礎(chǔ)，最近研究發(fā)現(xiàn)腸道益生菌能夠維持腸道菌群平衡，作用于腸道黏膜免疫系統(tǒng)，引起體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。

    益生菌是對機(jī)體健康有益的一類低致病性或無致病性微生物，作為促進(jìn)機(jī)體健康的有益菌，益生菌具有多方面的功能。研究表明，益生菌一般能夠在腸道定植，維持腸道菌群平衡，刺激胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性，活化腸道相關(guān)淋巴組織，促進(jìn)免疫球蛋白A的生成，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。

    1、畜禽腸道微生物研究概況

    動物腸道內(nèi)存在著多種大量的正常微生物，它們大部分與機(jī)體細(xì)胞密切接觸，交換能量物質(zhì)，相互傳遞信息，對宿主有營養(yǎng)、免疫、刺激生長和生物頡頏等作用。在正常情況下，腸道內(nèi)的正常微生物群在定性、定量、定位等方面保持平衡狀態(tài)，形成微生態(tài)平衡。Katouli用分子生態(tài)學(xué)的方法研究仔豬的腸道菌來源，發(fā)現(xiàn)仔豬出生4 h糞便中可以檢測出乳酸桿菌。另外環(huán)境因素對腸道菌群也起很大作用，從仔豬出生到斷奶后腸道菌的組成一直在發(fā)生連續(xù)變化，一般認(rèn)為直到育肥期才趨于平衡。在育肥期豬的腸道內(nèi)至少發(fā)現(xiàn)有30多個屬，lOO多種細(xì)菌；禽類胃腸道因解剖結(jié)構(gòu)和豬有明顯區(qū)別，其腸道菌的組成有其明顯特點。有學(xué)者研究報道雞嗉囊和砂囊內(nèi)的上皮細(xì)胞表面粘附著大量的乳酸桿菌。雞小腸內(nèi)以兼性厭氧菌如大腸桿菌、乳酸桿菌、鏈球菌和金黃色葡萄球菌為優(yōu)勢菌群，總量達(dá)1011個，雞的大腸很短，腸道菌群主要在盲腸。影響豬雞腸道微生物生態(tài)平衡的主要因素有宿主的遺傳免疫特性，腸道內(nèi)pH和氧化還原電位的高低以及寄主的食物結(jié)構(gòu)等[1]。Florin(2000)證明畜禽腸道微生態(tài)的組成、結(jié)構(gòu)、發(fā)育過程等是外界因素和動物體本身雙重作用的結(jié)果。Krause(1994)發(fā)現(xiàn)仔豬日糧中添加乳糖可有效降低腸道內(nèi)鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、霉菌和酵母菌的數(shù)量，而淀粉類飼料對上述菌群有刺激生長的作用。這主要由于仔豬體內(nèi)對淀粉類飼料的消化能力較低，而乳酸桿菌對乳糖的發(fā)酵比淀粉快，產(chǎn)生大量的乳酸抑制了其它菌的生長[2]。因而一系列寡糖添加劑通過改變飼料組分從而直接影響腸道菌的平衡。

    2. 腸道黏膜免疫屏障

    腸道不僅是消化吸收的重要場所，也是生物體最大的免疫器官，腸道粘膜面積龐大，它的結(jié)構(gòu)和功能構(gòu)成了強(qiáng)大的粘膜免疫系統(tǒng)，加之在腸道中生存著大量的微生物菌群(microbiologyflora)，同時經(jīng)口腔也會進(jìn)入的大量微生物和食物等抗原的侵襲，致使外源細(xì)菌和病毒很難突破這道防線而對機(jī)體產(chǎn)生危害，因此腸道黏膜擔(dān)負(fù)著重要的免疫功能。正常的腸黏膜屏障包括機(jī)械屏障、免疫屏障以及微生態(tài)屏障，這三個屏障在維持腸道微生態(tài)平衡，抵御病原體的入侵具有重要作用[3]。

    腸道黏膜免疫系統(tǒng)是免疫系統(tǒng)的第一道防線，其主要功能是為機(jī)體提供黏膜表面的防御作用，它包括免疫保護(hù)和非免疫保護(hù)兩個方面，宿主黏膜表面良好的防御功能依賴于非免疫保護(hù)作用和免疫應(yīng)答反應(yīng)兩者的健全和完整。系統(tǒng)主要由腸道相關(guān)淋巴組織和有關(guān)細(xì)胞與分子成分，如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、抗體、溶菌酶、抗菌肽等組成。腸黏膜的分泌性（sIgA）是機(jī)體黏膜免疫系統(tǒng)的一部分，IgA主要由黏膜淋巴結(jié)和固有膜淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生，與腸上皮腺體細(xì)胞合成的分泌片集合形成sIgA,它既可以抵抗腸腔內(nèi)的蛋白水解酶的水解作用，也不會激活補體。經(jīng)腸黏膜上皮細(xì)胞釋放到腸腔內(nèi)的sIgA,和腸黏膜表面的正常菌群混合存在，可以降低致病性微生物在黏膜表面的附著，中和細(xì)菌毒素，限制細(xì)菌的繁殖[4]。而益生菌通過口腔進(jìn)入體內(nèi)，它們首先作用的是黏膜免疫系統(tǒng)，許多研究表明，益生菌能夠刺激機(jī)體sIgA分泌細(xì)胞的生長，從而增加腸道內(nèi)sIgA的量，從而增強(qiáng)機(jī)體的抵抗能力。因此，在動物幼齡時添加益生菌不僅可以促進(jìn)免疫系統(tǒng)的發(fā)育成熟，還可以改變幼齡動物的免疫類型，調(diào)節(jié)免疫力[5]。

    3. 消化道菌群對免疫功能的影響

    正常菌群能增強(qiáng)宿主的黏膜免疫功能，促進(jìn)機(jī)體免疫器官的發(fā)育成熟，提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性及細(xì)胞因子介導(dǎo)素的分泌，增強(qiáng)紅細(xì)胞的免疫功能。正常菌群在特定部位寄生后，形成非特異性屏障，有利于機(jī)體對特異性抗原產(chǎn)生特異性抗體，增強(qiáng)特異性免疫應(yīng)答。腸道內(nèi)的正常菌群在腸道中生長、發(fā)育、繁殖，在胃酸pH2．5的條件下30 min內(nèi)保持100％活性，并形成生物薄膜附著在腸道黏膜上。正常菌群對動物的免疫增強(qiáng)作用與其抗原位點有關(guān)，在腸道具有抗原識別位點，在淋巴集結(jié)上發(fā)揮免疫佐劑作用，活化腸道黏膜內(nèi)的相關(guān)淋巴組織誘導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，通過淋巴細(xì)胞再循環(huán)而活化全身免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能[6]。動物每日攝取的食物都含有大量的微生物，其中也包括大量的病原微生物，但是正常個體的腸道中總是保持正常的菌群狀態(tài)，并不發(fā)生感染，從而維持腸道的正常結(jié)構(gòu)和功能狀態(tài)，其原因除了黏膜的機(jī)械屏障作用，常住菌群形成菌膜屏障，正常菌群對致病菌和“機(jī)會”致病菌的制約作用外，腸道黏膜免疫系統(tǒng)也起著極其重要的作用。

    4.益生菌對免疫功能的調(diào)節(jié)作用

    益生菌對仔豬腸道細(xì)胞免疫和體液免疫的調(diào)節(jié)作用，主要包括激活腸道中T、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，IL、IFN等一系列細(xì)胞因子的產(chǎn)生。實踐也已證明，通過飼喂乳酸菌和酵母菌發(fā)酵飼料能提高干擾素的活性和巨嗜細(xì)胞的活性。而且這種效果并不是由于腸道內(nèi)微生物系改變所致，而是由于嗜菌作用活性被激活和腸道產(chǎn)生抗體所致。有學(xué)者研究報道，飼喂植物乳桿菌和糞腸球菌可以顯著提高豬瘟抗體效價，以及飼喂蠟樣芽胞桿菌，可以提高仔豬流感和支原體抗體效價[7]。

    據(jù)李琰研究報道，用益生菌ND疫苗免疫雛雞，其免疫器官T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖功能和T細(xì)胞數(shù)量均高于對照組，同時外周血中的IgG,IgM、IgA抗體生成細(xì)胞數(shù)量以及法氏囊、脾臟指數(shù)均顯著高于對照組；盲腸扁桃體黏膜皺襞增多，微絨毛變密集，長度增大，分泌性蛋白質(zhì)顆粒增加，表明服用了益生素后，腸道內(nèi)的有益菌群可激發(fā)錐雞局部黏膜組織的體液和細(xì)胞免疫功能[8]。

    有學(xué)者研究報道，口服干酪乳酸菌能增強(qiáng)宿主腸道黏膜的免疫反應(yīng)，證實了干酪乳酸菌能促進(jìn)腸道分泌免疫球蛋白slgA，增強(qiáng)宿主的腸道黏膜免疫反應(yīng)，即使飼喂低劑量的干酪乳酸菌，也能引起slgA 的分泌。同時研究中發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌合劑能顯著促進(jìn)ANP對黏膜損傷的修復(fù)，保護(hù)腸的屏障功能，減少腸道脂多糖(LPS)和細(xì)菌移位[9]。Nahashon等研究表明，在蛋雞料中添加乳酸菌可增大回腸派伊氏結(jié)(Payer S Patch)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，這說明乳酸菌可刺激與抗原結(jié)構(gòu)有關(guān)的黏膜系統(tǒng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生slgA，增強(qiáng)動物免疫功能。

    5. 益生菌對免疫作用的調(diào)節(jié)途徑

    幼齡動物免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善,免疫調(diào)節(jié)功能差,以Th2免疫應(yīng)答為主，不同T細(xì)胞群和細(xì)胞因子能促進(jìn)或抑制不同的免疫應(yīng)答。益生菌的不同成分都可能調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng),如細(xì)胞壁成分、肽聚糖、細(xì)胞膜成分、特殊的DNA序列等都可加強(qiáng)免疫應(yīng)答。一些直接接觸腸壁或易位到腸壁內(nèi)的益生菌成分通過以下途徑可以通過增加IFN-IFN-C、IL-2和IL-12促進(jìn)Th0向Th1分化,和(或)降低IL-4減少Th0向Th2分化,調(diào)節(jié)Th1/Th2的比例,增加IgA、減少IgE的分泌。

    5.1 建立免疫耐受

    腸黏膜是接觸抗原最多的部位,其主要功能是排除抗原和產(chǎn)生耐受。因為所有的食物成分和消化道正常菌群都可被看作抗原,所以口服耐受是生命維持不可缺少的免疫功能。低劑量的抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-4、IL-10和轉(zhuǎn)移生長因子-B(TGF-B),抑制Th1細(xì)胞的分化,使機(jī)體產(chǎn)生口服耐受。高劑量的抗原可導(dǎo)致克隆無能,T細(xì)胞處于細(xì)胞不應(yīng)答狀態(tài),T細(xì)胞不能分泌IL-2和增殖。有研究報道,益生菌或化學(xué)益生素進(jìn)入消化道后被腸內(nèi)特有的M細(xì)胞攝取,傳遞給派依爾結(jié)內(nèi)的抗原遞呈細(xì)胞,從而促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化,Th1細(xì)胞可促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgA,抑制IgE的分泌,它產(chǎn)生的一些細(xì)胞因子(IL-2、IFN-A、IFN-B和TNF-A)可抑制腫瘤和病毒的生長[10]。

    免疫耐受的建立與PPs內(nèi)T細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。無菌(GF)鼠PPs中T細(xì)胞少于無特異病原菌(SPF)鼠。接種Bifidobacteriuminfants或Escherichiacoli的悉生鼠T細(xì)胞數(shù)量恢復(fù),但接種Clostridiumperfringens或Staphylococcusaureus的悉生鼠T細(xì)胞數(shù)量不變。經(jīng)誘導(dǎo)后,SPF鼠和前兩種悉生鼠產(chǎn)生口服耐受,GF鼠和后兩種悉生鼠未建立免疫耐受[11]。因此,正常動物腸道菌群似乎在口服耐受的產(chǎn)生中起決定作用,某些益生菌可能可以幫助機(jī)體建立免疫耐受。

    5.2 樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的腸道黏膜抗原遞呈通路

    近來發(fā)現(xiàn),樹突狀細(xì)胞(dendriticcells,DCs)對局部免疫應(yīng)答的調(diào)控有重要作用。樹突狀細(xì)胞是T細(xì)胞依賴型免疫應(yīng)答啟動所需的重要細(xì)胞。樹突狀細(xì)胞也存在于非淋巴組織如皮膚、呼吸道和消化道。樹突狀細(xì)胞可分為淋巴來源的樹突狀細(xì)胞(LDC)和單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞(MDC)兩個亞群。根據(jù)抗原的不同性質(zhì),樹突狀細(xì)胞釋放不同類型的信號到前T細(xì)胞,改變Th1/Th2比例。MDC可分為兩種亞型:MDC1,通過Toll樣甘露糖受體對脂多糖(LPS)、脂磷壁酸或CpGDNA發(fā)生應(yīng)答,活化核因子JB(NuclearFac-tJB,NF-JB)途徑,增強(qiáng)Th1應(yīng)答;MDC2,對免疫復(fù)合物和細(xì)胞因子〔細(xì)胞素、前列腺素(PGE2)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)〕發(fā)生應(yīng)答,產(chǎn)生CD40-CD40配體識別IL-4介導(dǎo)的Th2應(yīng)答。DCs表達(dá)緊密連接蛋白，其水平受細(xì)菌或細(xì)菌產(chǎn)物調(diào)節(jié)。固有層的DCs 能夠識別致病菌和非致病菌，并且，當(dāng)腸道感染致病菌時，大量DCs 被誘導(dǎo)從黏膜遷移至腸系膜淋巴結(jié)[12]。Christensen等發(fā)現(xiàn),乳酸桿菌的不同菌株對樹突狀細(xì)胞的活化方式不同,所有乳酸桿菌都能上調(diào)表面MHCⅡ類分子和B7-2(CD86),后者代表DC的成熟;其中以能產(chǎn)生IL-12的乳酸桿菌的上調(diào)作用更強(qiáng);而LactobacillusreuteriDSW11246不僅誘導(dǎo)IL-12能力差,還抑制其他乳酸桿菌的活化作用[13]。因此,DC可根據(jù)腸道微生物或益生菌調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞型的比例。

    5.3 改變腸黏膜表面的糖基化通過接種無菌動物發(fā)現(xiàn),一類重要的固有菌Bacte-roidesthetaiotamicron,可促進(jìn)腸表面的糖基化,建立有利于細(xì)菌自身的生態(tài)小環(huán)境,從而更好地與腸道表皮細(xì)胞作用[14]。Freitas等又發(fā)現(xiàn),B1thetaiotamicron誘導(dǎo)的糖基化改變,涉及表達(dá)水平和糖軛合物亞細(xì)胞拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的改變,變化更加離散,更為復(fù)雜[15]。該報道還認(rèn)為細(xì)菌來源的一些可溶性物質(zhì)和活菌可能都可以調(diào)節(jié)腸道的糖基化。

    6. 小結(jié)

    大量的研究報道顯示，國內(nèi)外科學(xué)家注意到防御疾病的關(guān)鍵就是維護(hù)好腸黏膜屏障，特別認(rèn)識到搞清楚腸道微生物菌群的菌種組成結(jié)構(gòu)、關(guān)鍵的功能菌類型、菌群的功能基因組成和菌群結(jié)構(gòu)與生態(tài)功能在不同環(huán)境下的動力學(xué)變化規(guī)律等方面的重要性，實現(xiàn)維持腸黏膜結(jié)構(gòu)和功能的恒定，維持定植在腸道表面的微生物群系平衡，保證腸黏膜免疫屏障維持正常的生理狀態(tài)，對腸黏膜抵御病原菌及毒素的能力增強(qiáng)，保持和調(diào)理腸道內(nèi)環(huán)境的健康，最終可在整合系統(tǒng)營養(yǎng)與生物學(xué)的基礎(chǔ)上實現(xiàn)無抗養(yǎng)殖為人類食品安全和環(huán)境和諧做出貢獻(xiàn)。

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