在把微細(xì)分散的固體或是附著于固體表面的液體作為固定相,把液體(與上述液體不相混合的)或氣體作為移動相的系統(tǒng)中,使試料混合物中的各成分邊保持向兩相分布的平衡狀態(tài)邊移動,利用各成分對固定相親和力不同所引起的移動速度差,將它們彼此分離開的定性與定量分析方法,稱為層析,亦稱色譜法。根據(jù)移動相種類的不同,分為液體層析、氣體層析二種。用作固定相的有矽膠、活性炭、氧化鋁、離子交換樹脂、離子交換纖維等,或是在硅藻土和纖維素那樣的無活性的載體上附著適當(dāng)?shù)囊后w,也可使用其他物質(zhì)。將作為固定相的微細(xì)粉末狀物質(zhì)裝入細(xì)長形圓筒中進(jìn)行的層析稱為柱層析(column chromatogra-phy),在玻璃板上涂上一層薄而均的物質(zhì)作為固定相的稱為薄層層析(thin-layer chromatography),后者可與用濾紙作為固定相的紙上層析進(jìn)行同樣的分析,即在固定相的一端,點上微量試料,在密閉容器中,使移動相(液體)從此端滲入,移動接近另一端。通過這種展開操作,各成分呈斑點狀移動到各自的位置上,再根據(jù)Rf值的測定進(jìn)行鑒定。當(dāng)斑點不易為肉眼觀察時,可利用適當(dāng)?shù)娘@色劑,或通過紫外燈下產(chǎn)生熒光的方法進(jìn)行觀察。也可采用在第一種移動相展開后再用另一移動相進(jìn)行展開(這時的展開方向應(yīng)與原方向垂直),使各成分分離完全的雙相層析(two-dimensional chromatography)。分離后,將斑點位置的固定相切取下來,把其中含有來自試料的物質(zhì)提取進(jìn)行定量分析。但為制備與定量,柱層析則更為適宜。在柱層析中,移動相從加入試料的一端展開到達(dá)另一端后,繼續(xù)展開使各成分和移動相一起向柱外分別溶出,這就是廣泛使用的所謂洗提層析(elution chromatography)。層析根據(jù)固定相與溶質(zhì)(試料)間親和力的差異分為吸附型、分配型、離子交換型(離子交換層析)等三種類型。但這并不是很嚴(yán)格的,有時常見到其中間類型。此外,近來也應(yīng)用親和層析,即將與基質(zhì)類似的化合物(通常為共價鍵)結(jié)合到固定相上,再利用其特異的親和性沉淀與其對應(yīng)的特定的酶或蛋白質(zhì)。