膠原蛋白的純化工藝應(yīng)根據(jù)表達(dá)系統(tǒng)和應(yīng)用需求選擇。若在構(gòu)建時(shí)設(shè)計(jì)了標(biāo)簽,可采用親和層析進(jìn)行高效純化;若無(wú)標(biāo)簽,則可根據(jù)膠原蛋白與雜蛋白的電荷、疏水性及分子大小等差異,選擇離子交換層析、疏水層析、凝膠過(guò)濾層析等方式,或通過(guò)復(fù)合模式層析進(jìn)一步提高純度。這些方法可靈活調(diào)整,以滿(mǎn)足不同的應(yīng)用和純度需求。
親和層析是一種基于特異性結(jié)合的分離方法,常用于重組膠原蛋白的初步純化。通過(guò)在表達(dá)的膠原蛋白中插入標(biāo)簽,如His標(biāo)簽,對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行特異性結(jié)合捕獲。
Ni2+對(duì)His標(biāo)簽具有特異性親和,可以使用博格隆Ni Bestarose FF或Ni Bestarose HP等已鰲合金屬離子的親和填料進(jìn)行捕獲,通常一步可達(dá)到80%以上的純度,雜質(zhì)去除效果好。隨后,再使用分子篩進(jìn)行精純以及濃縮換液,得到膠原蛋白原液。