本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)(Aerobicplatecount)的測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。

2術(shù)語(yǔ)和定義

3.2 冰箱：2℃~5℃。

3.4 天平：感量為0.1g。3.3 恒溫裝置：48℃±2℃。

3.5 均質(zhì)器。

3.7 無(wú)菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

3.8 無(wú)菌錐形瓶：容量250mL、500mL。

3.9 無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。

3.11 放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。加一個(gè)試管和配套試管塞（尺寸15*150mm）

4  培養(yǎng)基和試劑

4.2 菌落總數(shù)測(cè)試片

4.3 磷酸鹽緩沖液

4.4 無(wú)菌生理鹽水

6  操作步驟

6.1  樣品的稀釋

6.1.1 固體和半固體樣品：稱(chēng)取25g樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min，或放入盛有225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min，制成1∶10的樣品勻液。

6.1.2 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1∶10的樣品勻液。

6.1.3 用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1∶100的樣品勻液。

6.1.4 按6.1.3操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無(wú)菌吸管或吸頭。

6.1.5 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇1個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

6.1.6 及時(shí)將15mL~20mL冷卻至46℃~50℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于48℃±2℃恒溫裝置如：恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

6.2  培養(yǎng)

6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4mL)，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。

6.2.2 如使用菌落總數(shù)測(cè)試片,應(yīng)按照測(cè)試片所提供的相關(guān)技術(shù)規(guī)程操作。

6.3  菌落計(jì)數(shù)

6.3.1 可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-formingunits，CFU)表示。

6.3.2  選取菌落數(shù)在30 CFU~300 CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

6.3.3 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。

6.3.4 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

7  結(jié)果與報(bào)告

7.1 菌落總數(shù)的計(jì)算方法

7.1.3 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均＜30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.1.4 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均＞300CFU,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可記錄為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.1.5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分＜30CFU 或＞300CFU 時(shí),則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

7.2.1 菌落數(shù)小于100CFU 時(shí),按“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報(bào)告。

7.2.2 菌落數(shù)大于或等于100CFU 時(shí),第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數(shù)字,后面用 0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。

7.2.3 若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng),則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。

7.2.4 稱(chēng)重取樣以 CFU/g為單位報(bào)告,體積取樣以 CFU/mL為單位報(bào)告。