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如何估計懸液中的細菌濃度?

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-07-09
核心提示: 在我們?nèi)粘5臋z測工作和進行的某些實驗中,經(jīng)常會遇到需要預(yù)估細菌懸液的細菌濃度這樣的問題,又是后我們需要精確計數(shù)菌液
 在我們?nèi)粘5臋z測工作和進行的某些實驗中,經(jīng)常會遇到需要預(yù)估細菌懸液的細菌濃度這樣的問題,又是后我們需要精確計數(shù)菌液濃度,會用到血球計數(shù)板來進行計數(shù);但有時我們只需要一個比較粗略的估計值即可,這里我推薦大家使用麥氏比濁法。

 

麥氏比濁管是McFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標準濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,且都有定值。麥氏比濁管的配比如下:

這是傳統(tǒng)的麥氏比濁管的配制方法,目前也有市售的商品化產(chǎn)品,不需要自己配制,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥氏比濁管,與傳統(tǒng)的麥氏比濁管相比,保存時間更長也更穩(wěn)定。但麥氏比濁管具體應(yīng)該怎ô使用呢?

 

操作方法:

1、輕搖標準試管。

2、無菌操作將被測定的肉湯培養(yǎng)物加到與標準管相同直徑(大。┑臒o菌試管中。

3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標準管的濃度相同。

4、直接用眼睛看(需要經(jīng)驗,誤差較大)。

5、找張白紙,打上平行直線,然后觀察讀數(shù)(如圖示,利用光在不同濃度液體折射不同)。

 

注意事項:

1、如果測定的肉湯培養(yǎng)物不澄清,由培養(yǎng)物的值減去δ接種培養(yǎng)基的值來校正細菌濃度。4號管(肉湯培養(yǎng)物)-1號管(孵育過的δ接種的肉湯管)=3號管(校正讀數(shù))

2、如果肉湯顏色很深,把δ接種試管放在標準管的后面讀數(shù)即可。

3、測定好的細菌,最好做一下梯度稀釋涂布計數(shù)。

4、此濃度是對應(yīng)的大腸桿菌的濃度,如果是其他細菌,會有一定的差別,但通常差別都在一個數(shù)量級之內(nèi),適合于普通實驗。

5、此種方法測定的準確性不是很高,如果是對細菌數(shù)量要求較精確的,請用紫外分光光度計。

6、麥氏比濁液應(yīng)放室溫暗處保存,用前混勻,有效期為6個月。應(yīng)用時為了準確也可以使用比濁儀但一定要防止麥氏濁度標準管δ搖勻或已過期失效。

在微生物學(xué)檢驗中,麥氏比濁法常作為細菌鑒定、實驗配制菌液時大致判斷菌液濃度的一種方法,通常認為,如將配菌液濃度配成0.5麥氏比濁管時,相當于1.108細菌數(shù)/mL,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細菌大小差異很大,但除了真菌孢子,細菌的差別不大,結(jié)果不會有影響。

 

另附孢子菌懸液制作方法:

菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中,培養(yǎng)7d14d,使生成大量孢子。δ制備孢子懸液時,不得拔去棉塞。ÿ打開1支只供制備1次懸液,ÿ次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的ù菌孢子。

 

孢子懸液制備

在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水,用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮ù菌孢子,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi),然后注入40mL洗脫液。

錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10粒~15粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團的孢子散開,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中,用離心機分離沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脫液,重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.81.2)×106spores/mL的ù菌孢子懸液。若需要精確計數(shù),則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液,用血球計數(shù)板計數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當天使用,若不在當天使用應(yīng)在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內(nèi)使用。


編輯:songjiajie2010

 
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