首先我們應(yīng)該了解我們的無(wú)菌室應(yīng)該處于什么狀態(tài),有什么要求。一般情況下,我們的無(wú)菌室達(dá)到空間潔凈度10000級(jí)就可以了,但操作區(qū)域例如超凈工作臺(tái)、生物安全柜里需要達(dá)到潔凈度100級(jí),也就是我們常說(shuō)的“整體萬(wàn)級(jí),局部百級(jí)”。萬(wàn)級(jí)潔凈度對(duì)空間落菌的要求是:靜態(tài)檢測(cè),自然沉降菌≤3CFU/皿,百級(jí)潔凈度對(duì)空間落菌的要求是:靜態(tài)檢測(cè),自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說(shuō)平時(shí)我們做的空間驗(yàn)證,只要不超過(guò)這個(gè)標(biāo)準(zhǔn),就是符合要求的,因此也不必太過(guò)擔(dān)憂。
那么,怎樣能夠保證我們的無(wú)菌室符合要求?當(dāng)我們的無(wú)菌室出現(xiàn)異常應(yīng)該如何處理?
我們得先從無(wú)菌室的滅菌方式開(kāi)始講。一般無(wú)菌室的滅菌方式分為:紫外線照射、臭氧滅菌、化學(xué)熏蒸這幾種。這幾種滅菌方式各自有各自的特點(diǎn),大家可以根據(jù)自己的實(shí)際情況來(lái)選擇合適的滅菌方式,遇到異常難以解決時(shí),也可以考慮增加一種滅菌方式來(lái)解決。
紫外線照射:紫外線滅菌是利用適當(dāng)波長(zhǎng)的紫外線破壞微生物機(jī)體細(xì)胞中的DNA或RNA結(jié)構(gòu),造成生長(zhǎng)性細(xì)胞死亡來(lái)達(dá)到滅菌效果,屬于一種物理方式的滅菌,也是我們微生物檢測(cè)無(wú)菌室最常用的滅菌方式。該方法操作簡(jiǎn)單,使用方便,也比較經(jīng)濟(jì),可以殺滅各種微生物,包括細(xì)菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等,因此在實(shí)驗(yàn)室里,是最常見(jiàn)的滅菌方式。
但紫外線滅菌也有一定的缺點(diǎn),紫外線只能對(duì)直接照射到的微生物起到殺滅作用,因此只能對(duì)空間中照射到的地方起作用,一些照射不到的死角或者物品的內(nèi)部是無(wú)法達(dá)到效果的,因此使用紫外線滅菌的無(wú)菌室,也會(huì)輔助以一些化學(xué)試劑,例如潔爾滅、酒精等消毒劑對(duì)死角進(jìn)行清理。使用紫外線滅菌,應(yīng)當(dāng)定期檢測(cè)紫外線的強(qiáng)度,若是無(wú)法達(dá)到要求的強(qiáng)度,就應(yīng)該考慮更換紫外燈。根據(jù)2002年國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒技術(shù)規(guī)范》,紫外燈的要求是紫外線強(qiáng)度不得低于70μW/cm2(紫外燈1m處),而空間內(nèi)的紫外燈的布局也是有要求的,要求平均每m3不少于 1.5W。也就是說(shuō),假如你無(wú)菌室是5m2,實(shí)驗(yàn)室高度是3米,那么你的空間體積就是15m3,你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個(gè)方式就可以算一下你的無(wú)菌室需要多少紫外燈了。當(dāng)紫外線的強(qiáng)度達(dá)不到要求時(shí),就需要更換紫外燈了。
臭氧滅菌:臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,滅菌過(guò)程屬生物化學(xué)氧化反應(yīng)。
O3滅菌原理一般有以下三種:
1.臭氧通過(guò)氧化分解細(xì)菌內(nèi)部葡萄糖所需的酶,使細(xì)菌滅活死亡。
2.直接與細(xì)菌、病毒作用,破壞它們的細(xì)胞器和DNA、RNA,使細(xì)菌的新陳代謝受到破壞,導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
3.透過(guò)細(xì)胞膜組織,侵入細(xì)胞內(nèi),作用于膜內(nèi)的脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖,改變細(xì)胞的通透性,導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡。
使用臭氧滅菌,殺菌徹底,無(wú)殘留,殺菌廣譜,可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等,并可破壞肉毒桿菌毒素。另外,O3對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。O3為氣體,能迅速?gòu)浡秸麄(gè)滅菌空間,滅菌無(wú)死角。所以,臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣,必須是在封閉空間,且室內(nèi)無(wú)人條件下進(jìn)行,消毒后至少過(guò) 30min 才能進(jìn)入。另外臭氧的密度比空氣大,在空氣中會(huì)迅速下降到空間的底層,因此臭氧發(fā)生器也應(yīng)當(dāng)安裝在無(wú)菌室的頂部。一般滅菌時(shí)間選擇30min即可,要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m3。
化學(xué)熏蒸:化學(xué)熏蒸是一種十分傳統(tǒng)的空間滅菌方式,一般是采用易揮發(fā)氣化的化學(xué)物質(zhì)的蒸汽對(duì)空間微生物進(jìn)行殺滅的目的,一般常用甲醛、戊二醛、過(guò)氧化氫、過(guò)氧乙酸等。
這里以常用的甲醛熏蒸為例。一般甲醛熏蒸又稱甲醛高錳酸鉀熏蒸,將40%的甲醛溶液加入到高錳酸鉀溶液中,二者發(fā)生反應(yīng),放出大量的熱使甲醛蒸發(fā)到空間中,從而對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行滅菌。一般甲醛熏蒸的滅菌效果比較理想,對(duì)霉菌等較難清除的污染菌也有較好的殺滅效果,因此在無(wú)菌室被霉菌污染時(shí),通常都是使用甲醛進(jìn)行熏蒸來(lái)徹底消滅污染源。
但是甲醛熏蒸的缺點(diǎn)也是很明顯的,因?yàn)榧兹┦且环N強(qiáng)致癌性的化學(xué)品,對(duì)人體的傷害較大,在使用過(guò)程中需要特別注意,并且殘留量也要進(jìn)行嚴(yán)格的控制。每次熏蒸后,至少需要通風(fēng)24h才可以使用。
目前對(duì)熏蒸后甲醛的殘留量并沒(méi)有明確要求,還是要通過(guò)經(jīng)驗(yàn)來(lái)判斷,目前國(guó)家對(duì)居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3,所以我們也可使用甲醛含量測(cè)定儀來(lái)對(duì)熏蒸后的空間進(jìn)行檢測(cè)。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測(cè)無(wú)菌室的滅菌中已經(jīng)較少使用,主要也是因?yàn)椴僮鞅容^繁瑣,滅菌時(shí)間較長(zhǎng),進(jìn)行一次甲醛熏蒸之后,會(huì)有幾天無(wú)法使用無(wú)菌室進(jìn)行檢測(cè),所以只有在其他滅菌方法無(wú)法達(dá)到理想的滅菌效果時(shí),才會(huì)考慮進(jìn)行甲醛熏蒸。
而其實(shí)這種滅菌方式目前在很多藥企的無(wú)菌室滅菌,還是會(huì)經(jīng)常用到的,另外,有些生產(chǎn)區(qū)域如果長(zhǎng)期被霉菌污染,也會(huì)考慮用甲醛熏蒸的方法來(lái)解決。
了解了這幾種常用的無(wú)菌室滅菌方式,在我們?nèi)粘5墓ぷ髦幸部梢愿鶕?jù)自己實(shí)驗(yàn)室情況進(jìn)行選擇,尤其是長(zhǎng)期使用一種滅菌方式若是滅菌效果達(dá)不到理想的效果時(shí),可以根據(jù)實(shí)際情況更換滅菌方式,或者引進(jìn)一種新的滅菌方式兩者結(jié)合,以期達(dá)到預(yù)想的效果。