食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)

標(biāo)準(zhǔn)曲線你知道怎么畫嗎?看完這篇文章不要再說(shuō)自己不會(huì)畫標(biāo)準(zhǔn)曲線了!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-11-14
核心提示:分析檢測(cè)中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測(cè)物質(zhì)的含量,所以標(biāo)曲的制定是實(shí)驗(yàn)室工作中必不可少的工作。在真實(shí)的實(shí)驗(yàn)
分析檢測(cè)中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測(cè)物質(zhì)的含量,所以標(biāo)曲的制定是實(shí)驗(yàn)室工作中必不可少的工作。在真實(shí)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,制作標(biāo)注曲線會(huì)遇到各式各樣的問(wèn)題,比如標(biāo)注曲線彎曲、線性不夠好等問(wèn)題,造成不同情況的原因是什么呢?本文將詳細(xì)介紹。

前期測(cè)定注意事項(xiàng)

1、儀器校驗(yàn)好。

2、移取液體體積要精確,保證迅速準(zhǔn)確,盡可能用一根移液管;為減小人為誤差,同一種液體要一個(gè)人操作。
3、保證標(biāo)準(zhǔn)品的純度,所用標(biāo)準(zhǔn)品最好是新打開(kāi)的,純度較高的固體或溶液,防止污染。
4、容器要保證潔凈。
5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序。
6、如果要測(cè)OD值,應(yīng)保證測(cè)前各管液體充分混勻。
7、若還是有某個(gè)點(diǎn)誤差較大,應(yīng)舍棄。

8、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來(lái)的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。

9、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對(duì)于呈s型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

10、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

11、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對(duì)低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。

12、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

13、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng),但一般來(lái)說(shuō),相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98,對(duì)于有些實(shí)驗(yàn),至少要0.99甚至是0.999。

分光光度法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所遇問(wèn)題


1、單色光純度不夠

問(wèn)題:標(biāo)準(zhǔn)曲線上端向下彎曲。

措施:光度法中要求在最大吸收峰處測(cè)定吸光度,光度計(jì)的有效譜帶寬度越窄越好,有利于獲得純度高的單色光。

2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一致

如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍瑒t曲線的延線與縱坐標(biāo)相交;反之,與橫坐標(biāo)相交。

3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問(wèn)題

當(dāng)顯色反應(yīng)的靈敏度不高時(shí),被測(cè)物低于某一濃度就不能顯色,當(dāng)濃度不同時(shí),溶液對(duì)光的吸收、散射的程度不同,低濃度段往往彎曲,加上濃度高時(shí)部分膠體顆粒的聚沉,致使測(cè)定的吸光度降低,曲線上端向下彎曲。

4.操作上的原因

問(wèn)題:褪色反應(yīng),顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色,若比色時(shí)間超過(guò)了穩(wěn)定時(shí)間,標(biāo)準(zhǔn)系列中高濃度溶液顏色減褪,致使曲線上端向下彎曲。

措施:控制好顯色劑的加入時(shí)間,可以每加3份,停3~3min,再加上3份,依次進(jìn)行,以使每支比色管的顯色時(shí)間相近。

5、干擾物質(zhì)的影響

標(biāo)準(zhǔn)曲線檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)是實(shí)際操作中最大的難點(diǎn),也是工作中誤區(qū)和爭(zhēng)議最多的話題了!

先來(lái)了解下最重要的三大檢驗(yàn)項(xiàng)目:

1.精密度檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度檢驗(yàn):精密度檢驗(yàn)就是看試驗(yàn)點(diǎn)距離擬合的直線的距離有無(wú)異常,所以也稱線性檢驗(yàn)(擬合檢驗(yàn)),需用F檢驗(yàn),P<0.05作為線性檢驗(yàn)合格的標(biāo)準(zhǔn)。

2.截距檢驗(yàn)&斜率檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距檢驗(yàn)和斜率檢驗(yàn)分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,a與0有差別說(shuō)明有試劑空白或系統(tǒng)誤差,而b若與0沒(méi)差別說(shuō)明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)應(yīng)該是線性檢驗(yàn)結(jié)合失擬檢驗(yàn),以及殘差的正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)合才是統(tǒng)計(jì)學(xué)上比較完備的。

接下來(lái),我們看看實(shí)驗(yàn)員在標(biāo)準(zhǔn)曲線使用中還遇到過(guò)哪些問(wèn)題?

問(wèn)題一:標(biāo)準(zhǔn)曲線需要人為的增加(0,0)點(diǎn)嗎?

答:不能。通常的標(biāo)準(zhǔn)系列多是配制0,1,2,3mg/L系列這樣的說(shuō)法,沒(méi)做實(shí)驗(yàn)人為添加(0,0)很不妥,因?yàn)楹芏鄷r(shí)候0管進(jìn)入儀器可能也有響應(yīng)值,這也是我們考察試劑空白的一個(gè)重要步驟。這個(gè)0管在某些時(shí)候非常重要,如,全血鉛測(cè)定,我們采用牛血清來(lái)基體匹配標(biāo)準(zhǔn)系列,如果此時(shí)你用酸做空白或沒(méi)做實(shí)驗(yàn)人為添加(0,0),那你就很難做好標(biāo)準(zhǔn)曲線,所以,標(biāo)準(zhǔn)曲線的0管也是做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的重要考慮點(diǎn)。

問(wèn)題二:標(biāo)準(zhǔn)曲線需要減掉試劑空白來(lái)做嗎?

答:不需要。儀器測(cè)出來(lái)標(biāo)準(zhǔn)系列的響應(yīng)值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應(yīng)值來(lái)做,工作中我們也常用0管來(lái)做儀器調(diào)零。其實(shí)沒(méi)有必要那么麻煩,即使空白或0管有響應(yīng)值,在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),我們已經(jīng)認(rèn)為該響應(yīng)值就是0濃度,也就是扣除了這個(gè)空白的。

問(wèn)題三:什么時(shí)候用Y=bx和二次曲線呢?

答:標(biāo)準(zhǔn)曲線我們通常采用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)且要做統(tǒng)計(jì)完備的線性檢驗(yàn)和失擬檢驗(yàn),然后再做a與0的差別檢驗(yàn),如果a與0的統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來(lái)后同樣做線性檢驗(yàn)和失擬檢驗(yàn),如果線性檢驗(yàn)合格(P<0.05)且失擬檢驗(yàn)合格(p>0.05)此時(shí)你就可以采用Y=bX。二次曲線的采用同樣是這樣的道理,如果你Y=a+bX時(shí)擬合不合格,你就考慮用Y=a+bX+cX2,同樣做失擬檢驗(yàn),考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX 和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗(yàn)和失擬檢驗(yàn)合格,則采用Y=a+bX形式,這樣符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上參數(shù)最少的統(tǒng)計(jì)簡(jiǎn)潔性原則。

問(wèn)題四:標(biāo)準(zhǔn)曲線去查含量時(shí)是先減空白信號(hào)算樣品含量還是先算出空白含量相減呢?

答:工作中我們常要減掉空白得到樣品含量,現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法有的推薦先算出空白含量,用樣品含量相減,也有推薦先用樣品信號(hào)減空白信號(hào)然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量。而且這兩種算法常常差距很大。其實(shí)這種差距往往是低含量水平時(shí)才出現(xiàn),在低含量水平通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時(shí),本身不確定度就很大。這兩種方法都可以。個(gè)人推薦先用樣品信號(hào)減空白信號(hào)然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量,因?yàn)檫@樣出來(lái)的含量不確定度要小一些,而先算出空白含量再相減就增加了1次標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時(shí)的不確定度,因?yàn)楹玫臏y(cè)量永遠(yuǎn)是不確定度小的測(cè)量。

結(jié)語(yǔ)

要想繪制出合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線、使用好標(biāo)準(zhǔn)曲線,真心不易,必須將以上各個(gè)方面的條件都考慮進(jìn)去,即對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制也實(shí)行質(zhì)量控制,只有這樣, 才能得出理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文章(文字)來(lái)源:食品論壇網(wǎng)友分享。 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
關(guān)鍵詞: 標(biāo)準(zhǔn)
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗(yàn)技術(shù)
點(diǎn)擊排行
檢驗(yàn)技術(shù)
 
 
Processed in 0.021 second(s), 13 queries, Memory 0.91 M