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反向遺傳學(xué) reverse genetics

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-09-23

反向遺傳學(xué)是相對(duì)于經(jīng)典遺傳學(xué)而言的。經(jīng)典遺傳學(xué)是從生物的性狀、表型到遺傳物質(zhì)來(lái)研究生命的發(fā)生與發(fā)展規(guī)律。反向遺傳學(xué)則是在獲得生物體基因組全部序列的基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)靶基因進(jìn)行必要的加工和修飾,如定點(diǎn)突變、基因插入\缺失、基因置換等,再按組成順序構(gòu)建含生物體必需元件的修飾基因組,讓其裝配出具有生命活性的個(gè)體,研究生物體基因組的結(jié)構(gòu)與功能,以及這些修飾可能對(duì)生物體的表型、性狀有何種影響等方面的內(nèi)容。與之相關(guān)的研究技術(shù)稱為反向遺傳學(xué)技術(shù)。

    注:RNA病毒的反向遺傳學(xué),是采用病毒的遺傳材料,在培養(yǎng)細(xì)胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或類似病毒物質(zhì)。能夠拯救病毒的遺傳材料稱為感染性克隆,一般是在細(xì)菌質(zhì)粒中含有整個(gè)病毒基因組的cDNA拷貝,使得cDNA本身或從cDNA體外轉(zhuǎn)錄所得的RNA具有感染性。RNA病毒的反向遺傳系統(tǒng)通過(guò)定向修飾病毒的基因組序列,檢測(cè)被拯救的人工改造病毒的表型,可以在體內(nèi)(in vivo)有效地研究病毒基因結(jié)構(gòu)、功能和病毒-宿主相互作用。自1978年第一例RNA病毒Qβ噬菌體的成功拯救以來(lái),各類RNA病毒的分子生物學(xué)研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展,這主要?dú)w功于各種RNA病毒反向遺傳系統(tǒng)的建立和發(fā)展。該技術(shù)的核心是首先構(gòu)建RNA病毒的全長(zhǎng)cDNA分子,并使之受控于RNA聚合酶啟動(dòng)子,通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄過(guò)程再次得到病毒RNA,然后將該轉(zhuǎn)錄物RAN轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞可拯救到活病毒,由于這種拯救病毒是來(lái)自全長(zhǎng)cDNA分子,因此可以在DNA水平上對(duì)病毒基因組進(jìn)行各種修飾或改造,然后通過(guò)拯救病毒的表性變化來(lái)判斷這些基因操作的效果,從而達(dá)到對(duì)病毒基因組表達(dá)調(diào)控機(jī)制,病毒致病的分子機(jī)理等進(jìn)行研究的目的,甚至還可以得到減毒毒株,開(kāi)發(fā)新型的疫苗。目前已有許多RNA病毒的全長(zhǎng)感染性cDNA克隆構(gòu)建成功。
 
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