一、用途
軍團(tuán)菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于快速確證鑒定從選擇性平板上分離出的可疑嗜肺軍團(tuán)菌和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。試劑盒適用于檢測(cè)由疑似嗜肺軍團(tuán)菌引起的肺炎病人的樣品或環(huán)境樣品。試劑盒可分別檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和2-15群和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。(根據(jù)臨床微生物檢測(cè)手冊(cè)提及嗜肺軍團(tuán)菌血清16群,血清16群與血清6型交叉反應(yīng),因此理論上2-15群乳膠試劑也與血清16群凝集)。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。
二、原理
測(cè)試試劑1,乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群具有特異性的兔多克隆抗體。測(cè)試2-15群試劑的乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的多克隆兔抗體。軍團(tuán)菌菌種測(cè)試試劑,乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。(參見以下表格)當(dāng)乳膠顆粒與含軍團(tuán)菌或者從相關(guān)的軍團(tuán)菌加熱滅活的抗原的懸液混合后,發(fā)生免疫化學(xué)反應(yīng),使乳膠顆粒迅速凝集。血清1群抗體包被的乳膠顆粒只在遇到血清1群的抗原時(shí)才會(huì)發(fā)生凝集,同樣,血清2-15群抗體包被的乳膠顆粒只有在遇到血清2-15群中的任何一種抗原時(shí),才會(huì)發(fā)生凝集。軍團(tuán)菌抗體包被的乳膠顆粒與10種相關(guān)的軍團(tuán)菌會(huì)發(fā)生凝集。(參見以下表格)
血清1群乳膠試劑與血清1群抗原的反應(yīng)比血清2-15群乳膠試劑與血清2-15群抗原的反應(yīng)較快較強(qiáng)。其原因?yàn)樵谏a(chǎn)過程中2-15群抗體的混合彼此有一定的稀釋作用。軍團(tuán)菌乳膠與嗜肺軍團(tuán)菌血清1乳膠試劑的作用方法相同。
三、試劑盒組成成分
REAG TEST 1 1群測(cè)試試劑 HM
乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群特異性的兔多克隆抗體和鼠單克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉。(藍(lán)色瓶蓋)
REAG TEST 2-15 2-15群測(cè)試試劑 HM45b 軍團(tuán)菌血清2-15群乳膠試劑 2.5mL
乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的兔多克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黃色瓶蓋)
CONTROL + 陽性對(duì)照試劑 HM
可與測(cè)試試劑1和2-15反應(yīng)的不具活性的軍團(tuán)菌的抗原,含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)
REAG TEST SPECIES 軍團(tuán)菌菌種測(cè)試試劑 HM45d 軍團(tuán)菌血清特殊乳膠試劑 2.5mL
乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。(參見以下表格)
含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(紅色瓶蓋)
NaCl 0.85% 0.85%鹽水 HM40 0.85%生理鹽水 5.0mL
含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)
使用說明書
檢測(cè)板
攪拌棒
需要的其它材料
l 接種環(huán)
l 軍團(tuán)菌選擇性分離培養(yǎng)基
l 用于煮沸處理的玻璃試管
l 0.85%生理鹽水
四、警告和注意事項(xiàng)
安全:
1、試劑僅供體外診斷使用。
2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物?捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。
3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。
4、陽性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理。但在使用中,依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。
檢測(cè)過程:
1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。
2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。
3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。
4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。
5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。
6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。
7、注意凝集狀態(tài),呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。
8、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。
五、貯存及保質(zhì)期
檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2~8℃,并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。
六、樣本
檢測(cè)選擇性分離平板上分離的可疑軍團(tuán)菌菌落。
七、檢測(cè)過程
質(zhì)量控制:
在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè),以確證試劑的有效性。
1、檢測(cè)試劑的控制:輕輕搖勻測(cè)試試劑(HHM
2、陽性對(duì)照的控制:滴1滴陽性對(duì)照試劑(HM
測(cè)試程序:
1、各滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測(cè)板的3個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。
2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取3~4個(gè)可疑軍團(tuán)菌菌落,分別在2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水旁作涂片操作。
3、用攪拌棒在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻生理鹽水和菌落,形成均勻的較濃菌懸液。
4、如果菌懸液保持均勻狀態(tài),繼續(xù)第7步。如果菌懸液出現(xiàn)纖維狀或粒狀物(培養(yǎng)物較老或呈黏液狀時(shí),易出現(xiàn)此種現(xiàn)象),按下述步驟操作。
5、往玻璃試管中加入0.5mL的生理鹽水,從選擇性平板中挑取可疑菌落制成均勻的菌懸液。
6、煮沸菌懸液5分鐘,冷卻至室溫后,分別取30μL滴加在檢測(cè)板上2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。
7、輕輕的搖勻測(cè)試乳膠試劑(HM
8、滴1滴測(cè)試試劑1于一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上,滴1滴測(cè)試試劑2-15于另一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上。不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。
9、各用1支干凈的攪拌棒在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻菌懸液和測(cè)試試劑。
10、輕搖檢測(cè)板2分鐘,并觀察凝集結(jié)果。
11、記錄結(jié)果后,將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚怼?/span>
八、結(jié)果說明
觀察凝集結(jié)果,按下表進(jìn)行判斷
與1群測(cè)試試劑反應(yīng) |
與2-15群測(cè)試試劑反應(yīng) |
與種測(cè)試試劑反應(yīng) |
結(jié)果判斷 |
+ |
- |
- |
嗜肺軍團(tuán)菌血清1群 |
- |
+ |
- |
嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群 |
- |
- |
+ |
存在軍團(tuán)菌 |
- |
- |
- |
不存在軍團(tuán)菌 |
+ |
+ |
+ |
可能為非特異性凝集,結(jié)果不確定* |
+ |
+ |
- |
可能為非特異性凝集,結(jié)果不確定* |
+ |
- |
+ |
可能為非特異性凝集,結(jié)果不確定* |
- |
+ |
+ |
可能為非特異性凝集,結(jié)果不確定* |
*非特異性凝集不排除存在軍團(tuán)菌的可能性,只是結(jié)果不確定。
九、使用的局限性
1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。
2、纖維狀凝集可能為假陽性結(jié)果,需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確證。
3、培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)或黏稠培養(yǎng)物在生理鹽水中不易形成均勻的菌懸液而出現(xiàn)非典型的凝集。因此要按上述的方法對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行前處理。
4、HKM®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒用于檢測(cè)選擇性平板上分離出的可疑1-15群嗜肺軍團(tuán)菌。陽性結(jié)果的菌株應(yīng)利用其在不含半胱氨酸的軍團(tuán)菌選擇性平板上不生長(zhǎng)的特性確證其為軍團(tuán)菌屬。
十、檢測(cè)效果對(duì)比
HKM®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果對(duì)比,用二種商品檢測(cè)分離出的嗜肺軍團(tuán)菌、非嗜肺軍團(tuán)菌和易存在潛在交叉反應(yīng)的菌株,共128株。
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HKM® (所有血清群) |
總計(jì) |
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陽性 |
陰性 |
|||
另一已廣泛使用的乳膠試劑盒 (所有血清群) |
陽性 |
50* |
0 |
50 |
陰性 |
0 |
78 |
78 |
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總計(jì) |
50 |
78 |
128 |
靈敏度 50/50=100%
特異性 478/78=100%
一致性 128/128=100%
同時(shí)用HKM® 軍團(tuán)菌乳膠試劑盒和對(duì)比試劑盒檢測(cè)分離出的嗜肺軍團(tuán)菌和其它軍團(tuán)菌,共70株,以辨別嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和血清2-15群。
* 這組50株分離的菌株中,12株在兩種檢測(cè)試劑中均存在交叉反應(yīng)。它們分別是金黃色葡萄球菌(4)、差異檸檬酸桿菌(1)、鮑氏不動(dòng)桿菌(2)、斯氏普羅威登斯菌(1)、蠟樣芽孢桿菌(2)、肺炎克雷伯氏菌(1)、鏈球菌屬(1)。但所有這些菌株接種在軍團(tuán)菌選擇性平板上培養(yǎng)時(shí),均不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落特征非常不典型。同時(shí)蠟樣芽孢桿菌呈現(xiàn)非典型凝集(呈纖維狀)。
*
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HKM® |
|
|||
血清1群 陽性 |
血清2-15群 陽性 |
嗜肺軍團(tuán)菌 陰性 |
總計(jì) |
||
另一已廣泛使用的乳膠試劑盒 |
血清1群 陽性 |
8 |
0 |
0 |
8 |
血清2-15群 陽性 |
0 |
30 |
0 |
30 |
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嗜肺軍團(tuán)菌 陰性 |
0 |
0 |
32 |
32 |
|
總計(jì) |
8 |
30 |
32 |
70 |
所有分離出的嗜肺軍團(tuán)菌血清1群菌株與測(cè)試試劑2-15均無交叉反應(yīng),同樣地,所有嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群菌株與測(cè)試試劑1均無交叉反應(yīng)。所有分離的非嗜肺軍團(tuán)菌與HKM®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒中的兩種測(cè)試試劑均無交叉反應(yīng)。
軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑與所有測(cè)試檢查的嗜肺軍團(tuán)菌血清群都沒有交叉反應(yīng)。軍團(tuán)菌特殊乳膠試劑能檢測(cè)以下10種軍團(tuán)菌:
軍團(tuán)菌菌種 |
|
L .micdadei |
麥?zhǔn)宪妶F(tuán)菌 |
L. bozemanii 1 |
博氏軍團(tuán)菌1 |
L. bozemanii 2 |
博氏軍團(tuán)菌2 |
L. dumofffi |
杜氏軍團(tuán)菌 |
L. longbeachae 1 |
長(zhǎng)灘軍團(tuán)菌1 |
L. longbeachae 2 |
長(zhǎng)灘軍團(tuán)菌2 |
L. jordanis |
約旦軍團(tuán)菌 |
L. gormanii |
戈氏軍團(tuán)菌 |
L. anisa |
茴芹軍團(tuán)菌 |
L. feelei |
菲氏軍團(tuán)菌 |
軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑的特異性實(shí)驗(yàn)顯示legionella sainthelensi spp1,hacklaie spp1和 tucsonensis也能產(chǎn)生陽性結(jié)果。
十一、重復(fù)性
批內(nèi)重復(fù)性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組47種細(xì)菌樣品盤對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次,最終效價(jià)由參照/對(duì)照抗原測(cè)定,并且3次定性分析結(jié)果完全一致。
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