食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)

液相色譜各部分的維護(hù)保養(yǎng),一文就夠!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2021-12-31
核心提示:一、流動(dòng)相溶劑瓶的保養(yǎng)溶劑瓶是流動(dòng)相的起點(diǎn),通常是盛放水相溶液或是有機(jī)相溶液。1、水相溶液,對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō),首要的問(wèn)題是

一、流動(dòng)相溶劑瓶的保養(yǎng) 

 

溶劑瓶是流動(dòng)相的起點(diǎn),通常是盛放水相溶液或是有機(jī)相溶液。

 

1、水相溶液,對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō),首要的問(wèn)題是防止污染。對(duì)于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相,常換常新。

 

2、有機(jī)相溶液,對(duì)于有機(jī)相溶液,可以不用擔(dān)心細(xì)菌繁殖的問(wèn)題。但是有機(jī)相容易發(fā)生聚合,特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合,瓶子里就會(huì)出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過(guò)程的發(fā)生,裝乙腈時(shí)要用棕色的溶劑瓶,避免陽(yáng)光直射,更換乙腈時(shí)應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。

 

3、清洗過(guò)濾,溶劑瓶里的過(guò)濾頭,其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中,它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼,如果不慎堵塞會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢,因此必須進(jìn)行清洗,玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡,而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進(jìn)行超聲清洗。

 

二、高壓泵的保養(yǎng) 

 

泵是液相色譜的核心,泵將流動(dòng)相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中,并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。狀態(tài)正常的高壓泵是液相色譜準(zhǔn)確分析的基礎(chǔ),所以平日一定要重視對(duì)泵的維護(hù)。

 

1、泵壓力波動(dòng),很多情況下,泵的問(wèn)題反映在壓力上,壓力波動(dòng)又是常見(jiàn)的一類問(wèn)題。通常我們可以通過(guò)重新清洗流路和再次脫氣流動(dòng)相加以解決。

 

2、過(guò)濾白頭保養(yǎng),在泵的維護(hù)里還有一項(xiàng)常做的工作就是更換清洗閥上的過(guò)濾白頭,通常判斷的標(biāo)準(zhǔn)是純水以5mL/min流速清洗的時(shí)候,如果壓力超過(guò)1MPa則考慮更換。

 

三、進(jìn)樣器的保養(yǎng) 

 

進(jìn)樣器分手動(dòng)和自動(dòng)兩大類,雖然兩者工作模式不同,但使用的要點(diǎn)是基本一致的。

 

1、防止交叉污染,自動(dòng)進(jìn)樣器常見(jiàn)的問(wèn)題是交叉污染,交叉污染產(chǎn)生的原因很直接,樣品殘留在進(jìn)樣針內(nèi)外表面,并隨下一次進(jìn)樣進(jìn)入色譜系統(tǒng)。要解決交叉污染,主要靠清洗。

 

2、精細(xì)操作,手動(dòng)進(jìn)樣器的操作要點(diǎn)大致相同,應(yīng)使用液相色譜LC專用進(jìn)樣針,進(jìn)樣時(shí)插針應(yīng)插到底,不使用時(shí)將針頭留在進(jìn)樣器內(nèi),使用前后都要及時(shí)清洗。

 

四、色譜柱的保養(yǎng) 

 

色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù),且儀器基線平穩(wěn)。

 

1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩(如前所述)。

 

2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬,反之亦然?/span>

 

3、色譜柱反沖,納譜分析小分子分離液相色譜柱ChromCore系列和EcoPak系列色譜柱可以反沖;納譜分析手性色譜柱UniChiral系列色譜柱可以反沖,反沖可以除去留在柱頭的雜質(zhì)。但是納譜分析生物大分子液相色譜柱BioCore系列色譜柱不要反沖,否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

 

4、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

 

5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

 

6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。

 

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:

 

硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì),已烷使硅膠表面重新活化。

 

反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。

 

如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液,那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì),在甲醇(乙腈)沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。

 

陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強(qiáng)的鹽,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物)、甲醇、水依次沖洗。

 

7、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)晚上或更長(zhǎng)時(shí)間。

 

8、色譜柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。

 

在后兩種情況發(fā)生時(shí),小心擰開(kāi)柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復(fù)到新柱的水平。

 

柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護(hù)、延長(zhǎng)柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效,這是值得的。

 

通常以硅膠為基質(zhì)的色譜柱,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后,可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。

 

每次工作完后,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí),使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道,不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4~5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。

 

五、檢測(cè)器的保養(yǎng) 

 

1、光源部分

 

檢測(cè)器中非常重要的部件是光源,光源對(duì)發(fā)射能量有要求,一旦能量衰減到一定程度,就會(huì)出現(xiàn)基線噪聲變大,靈敏度降低等一系列影響使用的問(wèn)題,因此光源是一個(gè)消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h,當(dāng)?shù)竭_(dá)這個(gè)時(shí)限的時(shí)候,我們就要特別關(guān)注燈的能量狀況,可以通過(guò)儀器維護(hù)軟件中自帶的“燈能量測(cè)試”功能來(lái)判斷,測(cè)試的結(jié)果會(huì)分別評(píng)估低、中、高三個(gè)波長(zhǎng)段的能量,一旦某個(gè)波長(zhǎng)段的測(cè)試結(jié)果顯示失敗,就表示需要更換燈。

 

2、檢測(cè)池

 

檢測(cè)器中另一個(gè)重要部件是檢測(cè)池,也叫流通池。通常大家關(guān)心的一個(gè)問(wèn)題是檢測(cè)池被堵掉,因?yàn)闄z測(cè)池通常不是很耐壓,所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實(shí)上檢測(cè)池通常不太容易被堵,原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會(huì)被色譜柱攔下了,所以堵塞檢測(cè)器的東西基本都不是來(lái)自樣品的,很可能是后來(lái)“產(chǎn)生”的,比如含鹽流動(dòng)相殘留在檢測(cè)池中導(dǎo)致鹽析出。

 

六、廢液的處置 

 

液相色譜儀LC的廢液大部分含有有機(jī)溶劑,會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害,對(duì)環(huán)境也會(huì)產(chǎn)生污染,嚴(yán)禁隨意傾倒,應(yīng)及時(shí)處理。目前,國(guó)內(nèi)大部分實(shí)驗(yàn)室是將廢液送到專門的廢液處理站集中進(jìn)行無(wú)害化處理。 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
關(guān)鍵詞: 液相色譜
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 儀器設(shè)備搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關(guān)閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設(shè)備
點(diǎn)擊排行
 
 
Processed in 0.096 second(s), 18 queries, Memory 0.95 M