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新買的色譜柱活化和使用,注意了!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2023-10-30
核心提示:色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件,被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定,色譜柱的性能起著決定性的作用。因此,在日常工作中,應(yīng)
色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件,被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定,色譜柱的性能起著決定性的作用。因此,在日常工作中,應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng),以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

01 色譜柱的活化

反相色譜柱:使用新的C18柱時(shí),先用甲醇或乙腈沖洗20-30個(gè)柱體積,然后用甲醇/乙腈:水(50:50)沖洗10個(gè)柱體積,然后再用流動(dòng)相平衡10-30柱體積。


正相色譜柱:新柱用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。


離子色譜柱(SAX, SCX):新柱先用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積,然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相平衡。



部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流動(dòng)相中,用于反相色譜時(shí),先用異丙醇或乙醇沖洗色譜柱50-100個(gè)柱體積。



當(dāng)用HILIC模式時(shí),新柱用50倍柱體積50/50乙腈/水活化平衡,然后再用流動(dòng)相平衡20個(gè)柱體積。



02 色譜柱的日常保存

反相柱:100%甲醇或乙腈保存。

正相柱:異丙醇或正己烷保存。

離子交換柱:100%甲醇,或大于40%的有機(jī)相保存。

切忌用緩沖鹽保存色譜柱。


03 色譜柱的清洗和再生

反相C18色譜柱

清洗:每天柱子使用完后,立刻沖洗,如果使用緩沖液,必須先用相同比例的有機(jī)相/水沖洗20個(gè)柱體積,然后再轉(zhuǎn)換到100%有機(jī)相沖洗20個(gè)柱體積。

再生:用100%水,甲醇,三氯甲烷,甲醇,100%水分別沖洗20個(gè)柱體積,在第一次用100%水時(shí),進(jìn)樣5次200 μL二氯亞砜DMSO。

正相色譜柱

清洗:每次清洗都用低流速起步,當(dāng)檢測(cè)到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。先用10柱體積不含其它添加劑的流動(dòng)相中的弱溶劑,如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑反沖色譜柱。

再生:用四氫呋喃,甲醇,四氫呋喃,二氯甲烷,正己烷分別沖洗20個(gè)柱體積。

離子色譜柱

清洗:用100%水沖洗30個(gè)柱體積去除鹽,然后用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。

再生:先用高濃度鹽的緩沖液清洗(濃度可以是5-10倍,不超過1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇清洗,再用50%乙腈或甲醇保存。

04 色譜柱日常使用保養(yǎng)

使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度)

注意色譜的pH范圍,大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8

避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化

使用HPLC級(jí)試劑,流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙腈中

壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)

確認(rèn)流動(dòng)相中緩沖鹽的溶解性

確認(rèn)樣品在流動(dòng)相中的溶解性

避免壓力的突變


文章(文字)來(lái)源:網(wǎng)絡(luò) 
編輯:songjiajie2010

 
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