一、Western blot 技術(shù)起源
1975年,Edwin Southern發(fā)明了DNA雜交檢測(cè)技術(shù),命名為Southern blot。1977年,James Alwine、David Kemp和George Stark發(fā)明了RNA雜交檢測(cè)技術(shù),命名為Northern blot。兩年后位于美國(guó)斯坦福大學(xué)的George Stark發(fā)明了將蛋白從電泳凝膠上轉(zhuǎn)移到活化纖維素上的技術(shù),隨后Harry Towbin發(fā)展出更快速、簡(jiǎn)單的電轉(zhuǎn)技術(shù)。1981年Neal Burnette正式將這一技術(shù)命名為“Western blot”。
二、Western blot 用來(lái)干什么?
(一)確定目的蛋白的表達(dá)情況
這是Western blot最常規(guī)的應(yīng)用,如檢測(cè)患者的標(biāo)本與正常人的標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)條件處理后細(xì)胞與未處理的對(duì)照細(xì)胞之間目的蛋白的表達(dá)變化情況,通過灰度分析可以確定目的蛋白表達(dá)水平是升高還是降低。
(二)研究蛋白間的相互作用
這是與免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CO-IP)技術(shù)相結(jié)合的一種檢測(cè)蛋白質(zhì)之間相互作用的常用方法。通過CO-IP技術(shù)將相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合體分離出來(lái)后進(jìn)行凝膠電泳,然后利用相互作用的蛋白質(zhì)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。適用于對(duì)已知的蛋白質(zhì)的相互作用進(jìn)行檢測(cè),不適用于檢測(cè)一個(gè)蛋白質(zhì)未知的相互作用蛋白;也可以用于蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用的后續(xù)分析。
(三)確定目的蛋白的細(xì)胞定位
通過分別提取細(xì)胞不同部位的蛋白質(zhì),如膜蛋白、胞漿蛋白核蛋白或線粒體蛋白等,將分離出來(lái)的不同部位的蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot檢測(cè)可以分別檢測(cè)目的蛋白在不同部位的表達(dá)情況。
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