細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離,也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基,放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當或者條件控制不合適容易受到化學或者生物因素的污染。凡混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染,細胞污染不能全被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性。細胞污染根據(jù)污染源主要可以分為化學性、物理性和生物性污染。
化學性污染
培養(yǎng)環(huán)境中許多化學物質(zhì)都可以引起細胞的污染。化學物質(zhì)并不總是抑制細胞的生長,某些化學物質(zhì)如激素就可促進細胞的生長。不同細胞對化學物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學性污染的來源。
細胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分,如氨基酸,若濃度超過了合適的范圍,也會對細胞產(chǎn)生毒性。同樣,不同細胞系其最佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的,在培養(yǎng)中應(yīng)嚴格控制。
玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是最常見的化學性污染。為了避免金屬離子、有機分子、細胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對水的污染,在配制液體,清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水。
動物血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,但血清又是潛在的生物及化學污染的來源。由于血清采集于多個動物,而且不同廠商的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量各不相同,因此血清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進行一系列實驗時,為了保證實驗的可重復性,最好選用同一批次的血清。
細胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,并經(jīng)過機構(gòu)的鑒定,實驗者應(yīng)對上述成分進行純度鑒定。同時,正確配置和儲存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的,應(yīng)該采取標準的操作步驟,避免液體體積計算錯誤,混用類似化合物等錯誤。