細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進(jìn)行解離,也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細(xì)胞處理好,根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基,放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染。凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染,細(xì)胞污染不能全被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為化學(xué)性,物理性和生物性污染。
物理性污染
物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。
物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分,從而影響細(xì)胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫 度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。細(xì)胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中,可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變,如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制甚至細(xì)胞死亡。通過實驗室的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,可以減少環(huán)境中物理因素對細(xì)胞的影響。孵箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中,周圍不能放置能引起機械振動的設(shè)備,如離心機。培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應(yīng)放在固定的位置,為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中,試劑周圍不能放同位素。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時間后再進(jìn)行實驗,以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響。