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沙門(mén)氏菌常用培養(yǎng)基的配方及原理!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-07-28  來(lái)源:食品微生物檢驗(yàn)公眾號(hào)
核心提示:沙門(mén)氏菌病的病原體,屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。菌體大小(0.6~0.9)(1~3)微米無(wú)芽胞,一
 沙門(mén)氏菌病的病原體,屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。菌體大。0.6~0.9)×(1~3)微米無(wú)芽胞,一般無(wú)莢膜,除雞白痢沙門(mén)氏菌和雞傷寒沙門(mén)氏菌外,大多有周身鞭毛。營(yíng)養(yǎng)要求不高,分離培養(yǎng)常采用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基。生化反應(yīng)對(duì)本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠,不分解尿素,不產(chǎn)生吲哚,不發(fā)酵乳糖和蔗糖,能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛(wèi)芽糖,大多產(chǎn)酸產(chǎn)氣,少數(shù)只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。VP試驗(yàn)陰性,有賴(lài)氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對(duì)熱抵抗力不強(qiáng),在60℃15分鐘可被殺死。在水中存活2~3周。
 

檢測(cè)流程

 


 
培養(yǎng)基原理


緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙門(mén)氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)。

配方:(g/L)


用法:將各成分加入蒸餾水中,攪混均勻,靜置約10min,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.2士0.2,高壓滅菌121,15 min。

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB) Tetrathionate Broth Base

用途:用于沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養(yǎng),需加入煌綠和碘液。

配方:(g/L)

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth

用途:用于沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。

配方:(g/L)


用法:除亞硒酸氫鈉和L胱氨酸外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至55以下,以無(wú)菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/L L-胱氨酸溶液10mL(稱(chēng)取0.1 gL-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL,使溶解,再加無(wú)菌蒸餾水至100 mL即成,如為DL-胱氨酸,用量應(yīng)加倍)。搖勻,調(diào)節(jié)pH至7.0士0.2。

亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)

配方:(g/L)


用法:將前三種成分加入300mL蒸餾水(制作基礎(chǔ)液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和30mL蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20mL和30mL蒸餾水中,瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至80℃左右時(shí),先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,再混勻。調(diào)節(jié) pH,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50℃~55℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。

注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過(guò)48h會(huì)降低其選擇性,本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備,第二天使用。

XLD培養(yǎng)基XyloseLysineDeso

用途:選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門(mén)氏菌。

配方:(g/L)


用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。

將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,待冷至50~55傾注平皿。

注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備,第二天使用。

HE瓊脂

用途:用于沙門(mén)氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))。

配方:(g/L)


原理:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱,避免降低其選擇性。(按商品培養(yǎng)基說(shuō)明操作)

 

 

 

生化培養(yǎng)基


三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar

用途:生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細(xì)菌的生化反應(yīng)篩選

配方:(g/L)


用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,混勻,分裝試管,每管約2 mL~4 mL,高壓滅菌12110 min或11515 min,滅菌后制成高層斜面,呈桔紅色。

 

尿素瓊脂(pH 7.2)

用途:生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌脲酶檢測(cè)

配方:(g/L)


用法:除尿素、瓊脂和酚紅外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.2士0.2。另將瓊脂加人600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑后分裝,121℃高壓滅菌15 min。冷至50℃~55℃,加入經(jīng)除菌過(guò)濾的20%尿素溶液20mL。尿素的最終濃度為2%。分裝于無(wú)菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩?/span>

糖發(fā)酵管

配方:(g/L)

制法:①葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,調(diào)節(jié)pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min 。

②其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類(lèi)分別配好10%溶液,同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無(wú)菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純, 加熱后會(huì)自行水解者,應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。

試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng), 一般2d~3d。遲緩反應(yīng) 需觀察14d ~30d 。

編輯:songjiajie2010

 
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