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新版 GMP 第 225 條明確了“留樣”的概念：企業(yè)按規(guī)定保存的、用于藥品質(zhì)量追溯或調(diào)查的物料、產(chǎn)品樣品為留樣。并特別指出，用于產(chǎn)品穩(wěn)定性考察的樣品不屬于留樣。對(duì)于“穩(wěn)定性考察”，新版 GMP 專(zhuān)辟“持續(xù)穩(wěn)定性考察”一節(jié)，詳細(xì)規(guī)定了各項(xiàng)要求。在有關(guān)持續(xù)穩(wěn)定性考察條款中，還有穩(wěn)定性試驗(yàn)、長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)等表述。 目前，不少企業(yè)生產(chǎn)與研發(fā)的實(shí)驗(yàn)室對(duì)藥品留樣、穩(wěn)定性考察、持續(xù)穩(wěn)定性考察的概念理解的不是很清楚，更無(wú)法保證藥品研發(fā)、生產(chǎn)程序的規(guī)范運(yùn)行。今天我們來(lái)梳理下這三個(gè)概念。 留樣 考察目的：用于藥品質(zhì)量追溯或調(diào)查物料、產(chǎn)品 考察對(duì)象：主要針對(duì)每批生產(chǎn)的市售產(chǎn)品；和工藝中涉及的物料 考察時(shí)間、頻次：留樣應(yīng)保存至藥品有效期后一年；除穩(wěn)定性較差的原輔料外，用于制劑生產(chǎn)的原輔料留樣至少保存至產(chǎn)品放行后二年；每年需要進(jìn)行目檢觀察 考察環(huán)境：與產(chǎn)品標(biāo)簽上貯存條件一致 考察批次：每批產(chǎn)品均有留樣，用于制劑生產(chǎn)的原輔料每批均需有留樣 考察項(xiàng)目：目檢觀察或?qū)ξ锪线M(jìn)行鑒別 考察需量：全檢兩倍量（無(wú)菌檢查和熱原檢查等除外） 穩(wěn)定性考察 考察目的：考察原料藥或藥物制劑在溫度、濕度、光線(xiàn)的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過(guò)試驗(yàn)建立藥品的有效期。 考察對(duì)象：產(chǎn)品研發(fā)階段需要進(jìn)行影響因素試驗(yàn)（無(wú)包裝）、加速試驗(yàn)（市售包裝）、長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究試驗(yàn)（市售包裝）；產(chǎn)品批準(zhǔn)上市后首次投產(chǎn)前三批應(yīng)進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)；需要對(duì)中間產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，確定中間產(chǎn)品的貯存期限。 考察時(shí)間、頻次：影響因素試驗(yàn)考察 10 天，于第 5 天、10 天取樣；加速試驗(yàn)考察 6 個(gè)月，于第 1 個(gè)月、2 個(gè)月、3 個(gè)月、6 個(gè)月末分別取樣一次，按照穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目檢測(cè)；長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察至少與藥品有效期考察時(shí)間等長(zhǎng)，前 12 個(gè)月，每 3 個(gè)月取樣一次，之后與第 18 個(gè)月、24 個(gè)月、36 個(gè)月分別取樣進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果與 0 月比較以確定有效期。 考察環(huán)境：影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)、長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察試驗(yàn)按《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定進(jìn)行。 考察批次：影響因素試驗(yàn)為一批產(chǎn)品外，其他考察均需要進(jìn)行三批產(chǎn)品的穩(wěn)定性考察。 考察項(xiàng)目：考察項(xiàng)目應(yīng)全面反映藥品質(zhì)量變化情況。 考察需量：按照取樣頻次、考察項(xiàng)目所需的檢驗(yàn)量、產(chǎn)品批準(zhǔn)上市前預(yù)先確定的產(chǎn)品有效期確定穩(wěn)定性考察所需供試品量。 持續(xù)穩(wěn)定性考察 考察目的：在有效期內(nèi)監(jiān)控已上市藥品的質(zhì)量，以發(fā)現(xiàn)藥品與生產(chǎn)相關(guān)的穩(wěn)定性問(wèn)題（如雜質(zhì)含量或溶出度特性的變化），并確定藥品能夠在標(biāo)示的貯存條件下，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。 考察對(duì)象：主要針對(duì)市售包裝產(chǎn)品，但也需兼顧待包裝產(chǎn)品；產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中如發(fā)生重大變更或生產(chǎn)工藝、包裝材料發(fā)生變更時(shí)需要進(jìn)行穩(wěn)定性考察；返工或回收工藝考察時(shí)應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性考察。 考察時(shí)間、頻次：持續(xù)穩(wěn)定性考察的時(shí)間應(yīng)涵蓋藥品有效期，取樣時(shí)間參照長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察取樣時(shí)間間隔。 考察環(huán)境：貯存條件應(yīng)采用與藥品標(biāo)示貯存條件相對(duì)應(yīng)的《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)條件。 考察批次：至少每年應(yīng)考察一個(gè)批次，除非當(dāng)年沒(méi)有生產(chǎn)。 考察項(xiàng)目：考察項(xiàng)目應(yīng)全面反映藥品質(zhì)量變化情況。 考察需量：與長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察類(lèi)似。 摘要 穩(wěn)定性研究貫穿于藥品研發(fā)的整個(gè)階段，本文主要從新/仿制原料藥、新/仿制制劑穩(wěn)定性等角度對(duì)藥品穩(wěn)定性研究過(guò)程中一般性原則和需要注意事項(xiàng)進(jìn)行概述，望能起到拋磚引玉的作用。 1、穩(wěn)定性試驗(yàn)放置條件的由來(lái) 依據(jù)W.Grimm提出的概念（DrugsMade in Germany, 28:196-202, 1985 and 29:39-47. 1986），根據(jù)年度氣候條件，將全球分為4個(gè)氣候帶。 氣候帶Ⅰ：溫帶 21°C/45%RH 氣候帶Ⅱ：亞熱帶 25°C/60%RH 氣候帶Ⅲ：干熱 30°C/35%RH 氣候帶ⅣA：濕熱 30°C/65%RH 氣候帶ⅣB：非常濕熱 30°C/75%RH 因人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）三個(gè)地區(qū)僅包含了氣候帶Ⅰ和氣候帶Ⅱ，故在1993年10月協(xié)調(diào)的穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則中設(shè)定長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件為25°C±2°C/60%RH±5%RH；后因ICH國(guó)家/地區(qū)的藥品生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品普遍在全球多種氣候的國(guó)家或地區(qū)上市，ICH于2003年2月修訂了穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則（Q1A/R2）中長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件，由 25 °C± 2 °C/ 60 %RH± 5 %RH調(diào)整為 25 °C± 2° C/ 60 %RH± 5 %RH或 30 °C± 2 °C/ 65 %RH± 5 %RH。 2、穩(wěn)定性試驗(yàn)的類(lèi)型 （1）影響因素試驗(yàn) 影響因素試驗(yàn)主要包括考察原料藥或制劑對(duì)光、濕、熱、酸、堿、氧化等的穩(wěn)定性，需要充分了解其對(duì)光、濕、熱、酸、堿、氧化等的敏感性。以及可能的降解途徑及產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，并為包裝材料的選擇提供參考信息。 （2）加速試驗(yàn) 加速試驗(yàn)是考察原料藥或制劑在高于長(zhǎng)期貯藏溫度和濕度條件下的穩(wěn)定性，為處方工藝設(shè)計(jì)、偏離實(shí)際貯藏條件其是否依舊能保持質(zhì)量穩(wěn)定提供依據(jù)，并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定是否需要進(jìn)行中間條件下的穩(wěn)定性試驗(yàn)及確定長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件。 （3）長(zhǎng)期試驗(yàn) 考察原料藥或制劑在擬定貯藏條件下的穩(wěn)定性，為確認(rèn)包裝、貯藏條件及有效期/復(fù)檢期提供數(shù)據(jù)支持。此外，對(duì)臨用現(xiàn)配的制劑，或是多劑量包裝開(kāi)啟后有一定的使用期限的制劑，還應(yīng)根據(jù)其具體的臨床使用情況，進(jìn)行配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)或開(kāi)啟后使用的穩(wěn)定性試驗(yàn)。 總之，所有穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則應(yīng)該依據(jù)試驗(yàn)的目的進(jìn)行。例如，影響因素試驗(yàn)的光照試驗(yàn)是要考察原料藥或制劑對(duì)光的敏感性，通常應(yīng)采用去除包裝的樣品進(jìn)行試驗(yàn)；如試驗(yàn)結(jié)果顯示其過(guò)度降解，首先要排除是否因光源照射時(shí)引起的周?chē)h(huán)境溫度升高造成的降解，故可增加避光的平行樣品作對(duì)照，以消除光線(xiàn)照射之外其他因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。另外，還應(yīng)采用有內(nèi)包裝（必要時(shí)，甚至是內(nèi)包裝加外包裝）的樣品進(jìn)行試驗(yàn)，考察包裝對(duì)光照的保護(hù)作用。 3、穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品的要求及考察項(xiàng)目設(shè)置的考慮 （1）樣品要求 穩(wěn)定性試驗(yàn)的樣品應(yīng)具有代表性，試驗(yàn)樣品批次要求如表1所示。原料藥及制劑注冊(cè)穩(wěn)定性試驗(yàn)通常應(yīng)采用至少中試規(guī)模批次的樣品進(jìn)行，其合成路線(xiàn)、處方及生產(chǎn)工藝應(yīng)與商業(yè)化生產(chǎn)的產(chǎn)品一致或與商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)品的關(guān)鍵工藝步驟一致，試驗(yàn)樣品的質(zhì)量應(yīng)與商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)品的質(zhì)量一致；包裝容器應(yīng)與商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)品相同或相似。 （2）考察項(xiàng)目的選擇一般性原則 考察項(xiàng)目應(yīng)能反映產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況，即在放置過(guò)程中易發(fā)生變化的，可能影響其質(zhì)量、安全性和/或有效性的指標(biāo)，并應(yīng)涵蓋物理、化學(xué)、生物學(xué)和微生物學(xué)的特性。另外，還應(yīng)根據(jù)高濕或高溫/低濕等試驗(yàn)條件，增加吸濕增重或失水等項(xiàng)目。 ①原料藥考察項(xiàng)目 考察項(xiàng)目通常包括：性狀（外觀、旋光度或比旋度等）、酸堿度、溶液的澄清度與顏色、雜質(zhì)（工藝雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等）、對(duì)映異構(gòu)體、晶型、粒度、干燥失重/水分、含量等。另外，還應(yīng)根據(jù)品種的具體情況，有針對(duì)性地設(shè)置考察項(xiàng)目；如聚合物的黏度、分子量及分子量分布等；無(wú)菌原料藥的細(xì)菌內(nèi)毒素/熱原、無(wú)菌、可見(jiàn)異物等。 ②制劑考察項(xiàng)目 制劑的考察項(xiàng)目通常包括：性狀（外觀）、雜質(zhì)（降解產(chǎn)物等）、水分和含量等。另外，還應(yīng)根據(jù)劑型的特點(diǎn)設(shè)置能夠反映其質(zhì)量特性的指標(biāo)；如固體口服制劑的溶出度，緩控釋制劑、腸溶制劑、透皮貼劑的釋放度，吸入制劑的霧滴（粒）分布，脂質(zhì)體的包封率及泄漏率等。 ③制劑與包材相互作用考察 應(yīng)考察制劑與包裝材料或容器相容性研究的遷移試驗(yàn)和吸附試驗(yàn)。通常是通過(guò)在加速和/或長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)（注意藥品應(yīng)與包裝材料充分接觸）增加相應(yīng)潛在目標(biāo)浸出物、功能性輔料的含量等檢測(cè)指標(biāo)，獲得藥品中含有的浸出物及包裝材料對(duì)藥物成分的吸附數(shù)據(jù)；所以，高風(fēng)險(xiǎn)制劑（吸入制劑、注射劑、滴眼劑等）的穩(wěn)定性試驗(yàn)應(yīng)考慮與包裝材料或容器的相容性試驗(yàn)一并設(shè)計(jì)。 最后，在手性藥物的穩(wěn)定性考察中，還有一個(gè)問(wèn)題是：在原料藥的穩(wěn)定性中考察了立體構(gòu)型的穩(wěn)定性后，不再考察制劑中的立體構(gòu)型穩(wěn)定性。產(chǎn)生這一問(wèn)題的根源是，既然已在原料藥中對(duì)此問(wèn)題做了充分的研究，就無(wú)必要在制劑中重復(fù)進(jìn)行考察，尤其當(dāng)原料藥的結(jié)果顯示立體構(gòu)型比較穩(wěn)定時(shí)。其實(shí)這一問(wèn)題和在制劑中考察有關(guān)物質(zhì)是一樣的道理。有關(guān)物質(zhì)檢查作為反映質(zhì)量變化的一個(gè)重要指標(biāo)，在原料藥與制劑的穩(wěn)定性考察中，都是一個(gè)必須的質(zhì)控指標(biāo)。同樣，立體構(gòu)型是手性藥物的一個(gè)重要結(jié)構(gòu)特征，立體異構(gòu)體雜質(zhì)也是有關(guān)物質(zhì)的一部分，在穩(wěn)定性考察中均須對(duì)立體異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行必要的監(jiān)控，以全面反映手性藥物的穩(wěn)定性。另外，即使已證明原料藥的立體構(gòu)型在一般情況下是穩(wěn)定的，也不能保證在制劑中各種輔料的存在下，在特定的制劑工藝條件（酸、堿、溶液狀態(tài)、高溫等）下，立體構(gòu)型仍然穩(wěn)定。所以，仍有必要在制劑中監(jiān)測(cè)其立體構(gòu)型的穩(wěn)定性。 4、原料藥穩(wěn)定性研究 原料藥穩(wěn)定性試驗(yàn)考察項(xiàng)目一般性原則如表2所示。 表2原料藥穩(wěn)定性試驗(yàn)考察項(xiàng)目一般性原則 （1）影響因素試驗(yàn)注意事項(xiàng) 恒濕條件可采用恒溫恒濕箱或通過(guò)在密閉容器下部放置飽和鹽溶液來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)不同的濕度要求，選擇NaCl飽和溶液（15.5 °C~60 °C，75 %±1 %RH）或KNO3飽和溶液（25 °C，92.5 %RH）。 可采用任何輸出相似于D65/ID65發(fā)射標(biāo)準(zhǔn)的光源，如具有可見(jiàn)-紫外輸出的人造日光熒光燈、氙燈或金屬鹵化物燈。也可將樣品同時(shí)暴露于冷白熒光燈和近紫外燈下。 固體原料藥樣品應(yīng)取適量放在適宜的開(kāi)口容器中，分散放置，厚度不超過(guò)3mm（疏松原料藥厚度可略高些）；必要時(shí)加透明蓋子保護(hù)（如揮發(fā)、升華等）。液體原料藥應(yīng)放在化學(xué)惰性的透明容器中。 （2）加速試驗(yàn)注意事項(xiàng) 根據(jù)研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，預(yù)計(jì)加速試驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)接近顯著變化的限度，則應(yīng)在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮增加檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，如1.5月，或1、2月。如在25°C±2°C/60%RH±5%RH條件下進(jìn)行長(zhǎng)期試驗(yàn)，當(dāng)加速試驗(yàn)6個(gè)月中任何時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)量發(fā)生了顯著變化，則應(yīng)進(jìn)行中間條件試驗(yàn)。中間條件為30°C±2°C/65%RH±5%RH，建議的考察時(shí)間為12個(gè)月，應(yīng)包括所有的考察項(xiàng)目，檢測(cè)至少包括初始和末次的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)（如0、6、9、12月）。 原料藥如超出了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，即為質(zhì)量發(fā)生了“顯著變化”。如長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件為30°C±2°C/65%RH±5%RH，則無(wú)需進(jìn)行中間條件試驗(yàn)。擬冷藏保存（5°C±3°C）的原料藥，加速試驗(yàn)條件為25°C±2°C/60%RH±5%RH。 如樣品在較高的試驗(yàn)條件下質(zhì)量發(fā)生了顯著變化，則可降低相應(yīng)的試驗(yàn)條件；例如，溫度由50°C或60°C降低為40°C，濕度由92.5%RH降低為75%RH等。新原料藥或仿制原料藥在注冊(cè)申報(bào)時(shí)均應(yīng)包括至少6個(gè)月的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。 另外，對(duì)擬冷藏保存的原料藥，如在加速試驗(yàn)的前3個(gè)月內(nèi)質(zhì)量發(fā)生了顯著變化，則應(yīng)對(duì)短期偏離標(biāo)簽上的貯藏條件（如在運(yùn)輸途中或搬運(yùn)過(guò)程中）對(duì)其質(zhì)量的影響進(jìn)行評(píng)估；必要時(shí)可加試一批樣品進(jìn)行少于3個(gè)月、增加取樣檢測(cè)頻度的試驗(yàn)；如前3個(gè)月質(zhì)量已經(jīng)發(fā)生了顯著變化，則可終止試驗(yàn)。 目前尚無(wú)針對(duì)冷凍保存（-20°C±5°C）原料藥的加速試驗(yàn)的放置條件；研究者可取一批樣品，在略高的溫度（如5°C±3°C或25°C±2°C)條件下進(jìn)行放置適當(dāng)時(shí)間的試驗(yàn)，以了解短期偏離標(biāo)簽上的貯藏條件（如在運(yùn)輸途中或搬運(yùn)過(guò)程中)對(duì)其質(zhì)量的影響。對(duì)擬在-20°C以下保存的原料藥，可參考冷凍保存（-20°C±5°C）的原料藥，酌情進(jìn)行加速試驗(yàn)。 （3）長(zhǎng)期試驗(yàn)注意事項(xiàng) 擬冷藏保存原料藥的長(zhǎng)期試驗(yàn)條件為5°C±3°C。對(duì)擬冷藏保存的原料藥，如加速試驗(yàn)在3個(gè)月到6個(gè)月之間其質(zhì)量發(fā)生了顯著變化，則應(yīng)根據(jù)長(zhǎng)期試驗(yàn)條件下實(shí)際考察時(shí)間的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)確定有效期（復(fù)檢期）。擬冷凍保存原料藥的長(zhǎng)期試驗(yàn)條件為-20°C±5°C。對(duì)擬冷凍保存的原料藥，應(yīng)根據(jù)長(zhǎng)期試驗(yàn)放置條件下實(shí)際考察時(shí)間的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)確定其有效期（復(fù)檢期）。對(duì)擬在-20°C以下保存的原料藥，應(yīng)在擬定的貯藏條件下進(jìn)行試驗(yàn)，并根據(jù)長(zhǎng)期試驗(yàn)放置條件下實(shí)際考察時(shí)間的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)確定其有效期（復(fù)檢期）。
注冊(cè)申報(bào)時(shí)，新原料藥長(zhǎng)期試驗(yàn)應(yīng)包括至少3個(gè)注冊(cè)批次、12個(gè)月的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，并應(yīng)同時(shí)承諾繼續(xù)考察足夠的時(shí)間以涵蓋其有效期（復(fù)檢期）。仿制原料藥長(zhǎng)期試驗(yàn)在《化學(xué)藥品新注冊(cè)分類(lèi)申報(bào)資料要求（試行）》（2015年第80號(hào)）和《化學(xué)藥品仿制藥口服固體制劑質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)申報(bào)資料要求（試行）》（2016年第120號(hào)）文件中關(guān)于穩(wěn)定性試驗(yàn)的申報(bào)資料要求，具體如下：化學(xué)仿制藥上市申請(qǐng)和一致性評(píng)價(jià)申請(qǐng)時(shí)，在注冊(cè)批生產(chǎn)規(guī)模符合要求的前提下，申報(bào)資料至少需要包括三批中試規(guī)模及以上批次樣品6個(gè)月長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
