1、微生物樣品前期準(zhǔn)備

對(duì)于高通量測(cè)序的微生物樣品前期一定要注意取樣的及時(shí)性以及低溫性，樣本質(zhì)量是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的最關(guān)鍵因素，因此用于研究的實(shí)驗(yàn)樣本，在采集、貯存、運(yùn)輸和制備的過(guò)程中盡可能地做到迅速，最大限度的縮短從樣本采集到實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。且在所取樣本離體后條件允許應(yīng)應(yīng)立即投入液氮中速凍至少1小時(shí)，之后保存于-80℃冰箱或者干冰中，確保在實(shí)驗(yàn)操作前樣品始終處于-80℃，以避免DNA/RNA的降解。

2、真菌微生物取樣建議（大型真菌）

A.從菌體上取下生長(zhǎng)旺盛的組織，用無(wú)菌水沖洗干凈，再使用75%乙醇沖洗，用吸水紙吸干樣品表面；

B.如果組織體積較大，應(yīng)盡量將組織剪切成長(zhǎng)寬高均≤0.5cm的小塊；

C.將處理好的組織樣本保存于2mL或更大體積的旋蓋凍存管中或者用準(zhǔn)備好的錫箔紙包裹組織；

D.迅速置于液氮中冷凍1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長(zhǎng)期保存；

E.運(yùn)送方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險(xiǎn)品），干冰運(yùn)輸。

3、絲狀真菌取樣建議（平板培養(yǎng)）

A.根據(jù)絲狀真菌的生長(zhǎng)周期，選取最活躍時(shí)期進(jìn)行菌體收集；

B.無(wú)菌操作，將平板內(nèi)真菌菌絲刮取于無(wú)菌的離心管內(nèi)；

C.取樣后立即將菌體于液氮中冷凍1h，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長(zhǎng)期保存；

D.運(yùn)輸方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險(xiǎn)品），干冰運(yùn)輸。

4、細(xì)菌基因組取樣建議

A.顯微鏡下觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)，收集對(duì)數(shù)期的細(xì)菌；

B.將適量體積菌液轉(zhuǎn)移至2mL旋蓋尖底離心管中，室溫下14000×離心1min；

C.棄盡培養(yǎng)基，將細(xì)菌沉淀迅速置于液氮中冷凍1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中長(zhǎng)期保存；

D.運(yùn)輸方式：將樣品管用封口膜封口，再放置于50mL離心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管內(nèi)或其他支撐物內(nèi)加入液氮等危險(xiǎn)品），干冰運(yùn)輸。

5、注意事項(xiàng)劃重點(diǎn)

Tip1：送樣優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本；其次才是凍存樣本；

Tip2：用于DNA樣品制備實(shí)驗(yàn)的組織樣品處理及切割過(guò)程應(yīng)在冰上盡可能快速進(jìn)行，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致樣品DNA降解，影響測(cè)序結(jié)果；

Tip3：反復(fù)凍融和長(zhǎng)期保存的組織有更多的降解風(fēng)險(xiǎn)，所以應(yīng)一次性準(zhǔn)備好樣品，避免組織或菌體反復(fù)凍融。