材料與試劑
1.精制瓊脂粉
2.打孔器、加樣器、平皿
3.標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清,由指定的生物制品廠購買。
4.馬傳染性貧血病瓊脂擴(kuò)散用抗原,由指定的生物制品廠購買。
5.pH7.4PBS液
操作方法
1.取瓊脂粉1g,加含有1/萬硫柳汞的PBS液100ml,水浴加熱使之完全融化。
2.取平皿(直徑9cm),將融化的瓊脂倒入,每個(gè)平皿倒入15ml~18ml,使其厚度約
為2.5mm,冷卻后加蓋,放入4℃~8℃冰箱內(nèi),至少4h。
3.按7孔梅花圖案打孔,中央孔一個(gè),孔徑4mm,外周孔6個(gè),直徑6mm,孔距8mm
(中間孔至外周孔的中心距離),封底。
4.中央孔加抗原,2、5號(hào)孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,其余1、3、4、6孔分別加被檢血清,加滿為止。加畢后,平皿加蓋,平放入鋪有數(shù)層濕紗布的帶蓋搪瓷盤內(nèi),置15℃~30℃條件下孵育。每日觀察一次,連續(xù)3天。
結(jié)果判定
當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原之間出現(xiàn)一條明顯致密的沉淀線時(shí),再進(jìn)行被檢血清孔的判定。
陽性:被檢血清孔與抗原孔之間形成一條沉淀線,或者標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線末端向內(nèi)彎向毗鄰的被檢血清孔。
陰性:被檢血清孔與抗原孔之間無沉淀線,且標(biāo)準(zhǔn)血清陽性孔與抗原孔之間的沉淀線直向毗鄰的被檢血清孔。
可疑:標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原孔之間的沉淀線末端似乎彎向毗鄰被檢血清孔,但不易判斷。此種結(jié)果判為可疑?梢山Y(jié)果必須進(jìn)行復(fù)試,將抗原做2×,4×,6×,8×等倍數(shù)稀釋,進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散,觀察時(shí)間可延長至5d,最后判定結(jié)果。