接種:將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。
2、接種工具
在實(shí)驗(yàn)室中,用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時(shí)滴管、吸管也可作為接種工具進(jìn)行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時(shí),需要用到涂布棒。
1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.玻璃涂棒 5.接種圈 6.接種鋤 7.小解剖刀
3、微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)接種方法
(1)劃線接種法
平板劃線分離法--分區(qū)劃線分離法
①用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線,再在2、3……區(qū)依次劃線;
②每劃完一個(gè)區(qū)域,轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70度角,并將接種環(huán)滅菌一次,待冷后再劃下一區(qū)域;
③每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1~2次,使接種量逐漸減少,以獲得單個(gè)菌落;
④其他操作與上述曲線劃線分離法相同。
(2)斜面接種法
主要用于經(jīng)劃線分離培養(yǎng)所獲得的單個(gè)菌落的移種,以及觀察細(xì)菌的某些培養(yǎng)特征。
以菌種移種為例,其接種方法是:
①取一菌種管和培養(yǎng)基管,置左手食指、中指、無(wú)名指間,拇指壓住兩管底部上側(cè)面,使菌種管位于外側(cè),培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè);
②右手拇指和食指分別旋松兩管棉塞;鹧鏈缇臃N環(huán);
③以右手小指與手掌,小指與無(wú)名指分別夾取棉塞(先外管后內(nèi)管),將兩管口迅速通過(guò)火焰1~2次;
④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中,從斜面上取菌少許,迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中,在斜面底部向上劃一條直線,然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線,直至斜面上方頂端;
⑤取出接種環(huán),火焰滅菌管口,塞上棉塞(先塞內(nèi)管);最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好;
⑥做好標(biāo)識(shí),置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時(shí)。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面、透明度、色澤等特征。
(3)涂布接種法
涂布法接種是一種常用的接種方法,不僅可以用于計(jì)算活菌數(shù),還可以利用其在平板表面生長(zhǎng)形成菌苔的特點(diǎn)用于檢測(cè)化學(xué)因素對(duì)微生物的抑殺效應(yīng)。
原理:將一定濃度,一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上,再用涂布棒快速地將其均勻涂布,使長(zhǎng)出單菌落而達(dá)到分離的目的。
(4)液體接種法(肉湯接種)
①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管;
②滅菌接種環(huán),從菌種管取菌,伸入培養(yǎng)基管中,在接近液面的管壁上方輕輕研磨,并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和,使細(xì)菌混合于培養(yǎng)基的液體中。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時(shí)培養(yǎng)后觀察生長(zhǎng)特征。
肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項(xiàng):
a.發(fā)育程度:有無(wú)生長(zhǎng)、微弱、中等、旺盛;
b.混濁度:有無(wú)及程度(混、中等、微混、透明)、均勻混濁、有顆粒、絮狀生長(zhǎng);
c.沉淀:有無(wú)及量多少、性狀(粉狀、顆粒狀、絮狀、沾性);
d.表面:有無(wú)生長(zhǎng)、性狀(膜狀、環(huán)狀)、菌膜厚薄及表面特征(光滑、顆粒、皺狀);
e.其他:有無(wú)特殊氣味,色素。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無(wú)氣體。
(5)穿刺接種法(半固體接種)
多用于保存菌種、觀察動(dòng)力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細(xì)菌的某些生化反應(yīng)。
①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管;
②以滅菌接種針從菌種管取菌,垂直刺入培養(yǎng)基的中心(半固體或一般瓊脂高層)直達(dá)近管底部(但不能完全刺到管底),接種針應(yīng)沿原路退出;
③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到:沿穿刺線生長(zhǎng),線外的培養(yǎng)基清亮表示細(xì)菌無(wú)動(dòng)力;穿刺線模糊不清,或沿穿刺線向外擴(kuò)散生長(zhǎng),或整個(gè)培養(yǎng)基混濁表示細(xì)菌有動(dòng)力。