一、目的
為證實在進行四個以上數(shù)量級進行定量時, LC/MS/MS的樣品殘留量可降低至可測得的水平以下。
二、背景
現(xiàn)今質譜儀的靈敏度已經(jīng)能夠實現(xiàn)跨五個數(shù)量級的檢測,且柱上進樣量的定量下限可低至阿克級。要使高性能質譜儀的靈敏度不斷增加,也要求LC系統(tǒng)上的樣品交叉污染達到最低,以優(yōu)化分析性能。
有關驗證跨多個數(shù)量級的生物分析方法的規(guī)范通常要求最高濃度校準品的樣品殘留量不多于最低濃度校準品的20%。1因此,為使校準范圍跨四個數(shù)量級,必須使樣品殘留量低至0.002%以下。
若校準范圍在四個數(shù)量級以上,則必須使交叉污染減少至更低的水平。通常,隨著對柱上進樣量交叉污染的要求不斷嚴格,系統(tǒng)污染變得非常關鍵。LC系統(tǒng)及方法必須能夠重復地將分析物自進樣器、管道及色譜柱上去除,以使每次進樣都沒有交叉污染。
在對奧美拉唑進行分析時,Xevo® TQ-S上的ACQUITY UPLC® I-Class系統(tǒng)可使樣品殘留量減少至0.0005%以下,且其線性定量范圍跨度可達四個數(shù)量級以上。
三、解決方案
Xevo TQ-S是具有高靈敏度的用于LC/MS/MS分析的質譜儀。它需要一個能夠解決交叉污染問題的UPLC® 入口,以與該儀器寬泛的線性動態(tài)范圍相匹配。ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可選用兩種樣品管理器:固定定量環(huán)(SM-FL)或流通針式(SM-FTN)進樣器,這兩者在設計上均能實現(xiàn)良好的抗交叉污染性能。在分析奧美拉唑時,采用SM-FTN設計。該種類型的進樣器,在分析過程中,以移動相(梯度)沖洗針頭內部。在進樣口,F(xiàn)TN采用單種溶劑清洗針頭外部,且在設計上能夠實現(xiàn)防止清洗溶液與樣品或流動相接觸。在密封面同時清洗針頭以及密封墊可減少污染幾率。清洗程序已編入本方法中,且可設置為在進樣之前以及進樣之后清洗。清洗溶劑的組成取決于樣品,且其必須能夠很容易地溶解分析物。對于pKa為8.8的奧美拉唑來說,可采用含有氫氧化銨的清洗溶劑來清洗注射器。此外,當將氫氧化銨用于流動相時,系統(tǒng)的交叉污染將更低。在堿性條件下,可使奧美拉唑的離子化效率進一步提高。為評估交叉污染,向色譜柱注射具最高濃度(10 ng/mL或10 pg)的標準品。如圖1所示,在注射最高濃度標準品之后首次進行空白注射時,未觀察到有交叉污染。
基于校準曲線,確定樣品殘留量低于0.0005%,而這低于質譜的檢測下限。如圖2所示,在500 ag至10 pg范圍內,采用1/x權重系數(shù),可獲得相關系數(shù)為0.99997的線性,這足以證實可在與Xevo TQ-S連用的ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)上對奧美拉唑進行線性校準。
四、小結
ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)非常適用于需要跨四個以上數(shù)量級進行定量的高靈敏度LC/MS/MS方法的交叉污染要求。在對奧美拉唑進行分析時,在Xevo TQ-S上未檢測到樣品殘留,且由此可知,樣品殘留量已減少至0.0005%以下。由于樣品殘留量很少,可在500 fg/mL至10 ng/mL或500 ag至10 pg之間進行校準。