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在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預熱時間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計，開機后儀器自動進入自檢(初始化)狀態(tài)，約需10分鐘左右。
在分光光度計預熱這個環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問題，如開機只預熱電路系統(tǒng) (不調(diào)節(jié)波長、打開吸收池暗箱蓋預熱等)或認為初始化過程就是預熱等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機后儀器自檢 (初始化)結束后，在測定窗口上，設置所需波長值， 用一個吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào) “0000A”后，預熱儀器，當儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進行測定。
對于紫外可見分光光度計，由于有雙光源 (鎢燈與氘燈)，為了延長燈的使用壽命，開機自檢完成后可以關掉測定時不用的光源燈。
分光光度計在測定過程中，發(fā)現(xiàn)同一個溶液在不同時間里其測定結果不同，即重復性不好，其原因是什么?排除測定錯誤因素外，可能原因有：
(1)儀器預熱時間不夠或預熱方法不對所造成，應延長預熱時間或采用正確的預熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導致。這時標準溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續(xù)使用時間不應超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min 。
樣品室的主要作用就是放置樣品，液體測試一般使用比色皿，比色皿分為石英和玻璃兩種，玻璃比色皿主要用于可見區(qū)（320nm-2500nm），在紫外區(qū)有吸收，不適用于紫外區(qū)，石英比色皿可以用于紫外可見近紅外區(qū)（190nm-2500nm），另外有些透明有機玻璃也可以用作吸收池。
（1）比色皿上方通常會有字母標識，各型號標識稍有差別，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass 玻璃) ，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz 石英) 或者 “S”（Silicide石英玻璃）。
（2）使用紫外可見光分光光度計來鑒別玻璃、石英比色皿：現(xiàn)行國家檢定規(guī)程規(guī)定石英比色皿在250nm下吸光度應小于0.07abs，若吸光度大于0.07abs 則為玻璃比色皿。
使用需要配對的比色皿，在可適用的相同波長下，以空氣或者純水為介質(zhì)，使用透光率T進行測量，將每組比色皿中的一只透射率調(diào)為100%，然后測量另外一只透光率，凡透射率之差不超過0.5%T，即可配對使用。
比色皿是分析過程中對結果有很大影響的一個因素，比色皿污染之后對測試的影響更大，會使測試不穩(wěn)定甚至結果不準，因此完成樣品測定之后，必須徹底清洗比色皿，下列清洗流程僅供參考：蒸餾水清洗——乙醇清洗——干燥。
如果比色皿被污染，請按照如下流程清洗：在洗滌劑中浸泡約10min（30-50℃）——蒸餾水清洗——再加有少量雙氧水的稀硝酸中浸泡約30min——蒸餾水清洗——干燥。
注：如果比色皿被有機物污染，請先用如丙酮等有機溶劑將有機物洗去并用蒸餾水清洗。
值得注意的是：分析實驗常用的鉻酸洗液不宜用于比色皿洗滌，這是因為帶水的比色皿在該洗液中可能會產(chǎn)生熱量，致使比色皿膠接面裂開而損壞。同時經(jīng)洗液洗滌后的比色皿還可能殘存微量鉻(鉻在紫外區(qū)有吸收) ，因此會影響實驗的測定。
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時，手指應拿毛玻璃面的兩側，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時應注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規(guī)定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測幾個點的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應在該品種項下規(guī)定的測定波長±2nm以內(nèi)。
5、供試品應取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應取2份。并進行平行操作，每份結果與平均值的偏差應在±0.5%以內(nèi)。
6、選用儀器的狹縫寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
1、若實驗中需大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
3、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光 電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在 預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩(wěn)。
6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下：
分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處。 將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應考慮其對測試結果的影響。
