1、掌握醬油、水果汁、果醬中山梨酸、苯甲酸的測定原理及方法。
二、原理:
樣品酸化后,用乙醚提取山梨酸,苯甲酸。將樣品提取液濃縮,點于漿酰胺薄層板上,展開,顯色后,根據(jù)薄層板上山梨酸,苯甲酸的比移值與標(biāo)準(zhǔn)比較定性,并可進行概略定量。
三、試劑與儀器:
1、異丙醇
2、正丁醇
3、石油醚沸程:30-60℃。
4、乙醚:不含過氧化物
5、氨水
6、6N鹽酸:取100毫升鹽酸
7、無水乙醇。
8、聚酰胺粉:200目。
9、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密稱取0.2000克山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中,并稀釋至刻度,此溶液每毫升相當(dāng)于200毫克山梨酸。
10、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密稱取0.2000克苯甲酸,用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中,并稀釋至刻度,此溶液每毫升相當(dāng)于2毫克苯甲酸。
11、展開劑
(1)正丁醇-氨K--無水乙醇(7:1:2)
(2)異丙醇-氨水-無水乙醇(7:1:2)
12、顯色劑:O.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液,用0.1N氫氧化鈉溶液
調(diào)至PH=8。
13、4%氯化鈉酸性溶液:于4%的氯化鈉溶液中加少量6N鹽酸酸化。
14、吹風(fēng)機。
15、層析缸。
16、玻璃板:10 X 18cm
17、微量注射器:10微升,100微升。
18、噴霧器。
四、操作方法
1、樣品提取
稱取2.5克事先混合均勻的樣品,置于25毫升帶塞量筒中,加0.5毫升6N鹽酸酸化,用15、10毫升乙醚提取兩次,每次振搖1分鐘,將上層醚提取液吸人另一個25毫升帶塞量筒中,合并乙醚提取液。用3毫升4%氯化鈉酸性溶液洗滌兩次,靜止15分鐘,用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾人25毫升容量瓶中。加乙醚至刻度混勻,吸取l0.0毫升乙醚提取液分兩次置于10毫升帶塞離心管中,在約40 (2的水浴上揮發(fā)干,加入0.10毫升乙醇溶解殘渣,備用。
2、測定
(1)聚酰胺粉板的制備:稱取1.6克聚酰胺粉,加0.4克可溶性淀粉加約重5毫升,研磨3-5分鐘,立即倒入涂布器內(nèi)制成10 X 8cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊,于室溫干燥后保存,于80℃干燥1小時,取出,置于干燥器中保存。
(2)點樣:在薄層板下端2cm的基線上,用微量注射器點1微升,2微升樣品液,同時各點1微升、2微升山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
(3)展開與顯色:將點樣后的薄層板放人預(yù)先盛有展開劑[(1)或(2)]的展開槽內(nèi),展開槽周圍貼有濾紙,待溶劑前沿上展至lOcm,取出揮干,噴顯色劑、斑點成黃色,背景為藍色。樣品中所含有山梨酸、苯甲酸的量與標(biāo)準(zhǔn)斑點比較定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82,0.73)。
A×1000
計算: X=( A×1000)/(m×10/25×V2/V1×1000)
X:樣品中山梨酸(苯甲酸)的含量,g/kg;
A:測定用樣品液中山梨酸(苯甲酸)的含量,mg;
M:樣品質(zhì)量,g;
Vl:加入乙醇的體積,ml.,
V2:測定時點樣的體積,ml; ·
10:測定時吸取乙醚提取液的體積,ml;
25:樣品乙醚提取液總體積,m1。
注:此方法還可以同時測定果醬、果汁中的糖精。