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中藥材中黃曲霉毒素檢測方案—HPLC(藥典方法)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-11-07  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示:黃曲霉毒素危害:黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強的致癌性,主要存在于藥材、谷物、
 黃曲霉毒素危害:

    黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強的致癌性,主要存在于藥材、谷物、堅果、棉籽以及動物飼料相關的產(chǎn)品中。其毒性遠遠高于氰化物、砷化物和有機農(nóng)藥的毒性,其中以B1毒性最大。當人攝入量大時,可發(fā)生急性中毒,出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。當微量持續(xù)攝入,可造成慢性中毒,生長障礙,引起纖維性病變,致使纖維組織增生。 

國家重視程度:

    近年來,各級食品藥品監(jiān)管部門不斷加大中藥生產(chǎn)流通監(jiān)管力度,努力保持中藥質(zhì)量總體穩(wěn)定。

    國家食品藥品監(jiān)督管理局關于規(guī)范中藥生產(chǎn)經(jīng)營秩序嚴厲查處違法違規(guī)行為的通知(國食藥監(jiān)安[2012]187號中,要求加強對重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素等安全性指標的檢測和控制,切實保證中藥材質(zhì)量和安全,另要求企業(yè)具備與生產(chǎn)品種相適應的檢驗設備和能力,嚴把質(zhì)量檢驗關!秶宜幤钒踩“十二五”規(guī)劃》,規(guī)劃中明確提出“開展藥品快速檢驗技術研究,搭建檢驗技術共享平臺”、“加快推進藥品快速檢驗技術在基層的應用,配置快速檢驗設備”、“加強縣級機構快速檢驗能力建設”的要求。
中藥中黃曲霉毒素的檢測方法:

    2010版《藥典》附錄IX V 黃曲霉毒素測定采用高效液相色譜法,另外增補藥典描述該法檢測建立增加柱后光化學衍生法。

華安麥科作為國內(nèi)最早從事霉菌毒素檢測研究的高新技術企業(yè)對黃曲霉毒素檢測也有深刻的探索研究,下面就我們的實踐和大家分享一下,免疫親和柱-高效液相色譜法-柱后光化學衍生等內(nèi)容。

【原理】:

    樣品經(jīng)甲醇-水提取,提取液經(jīng)過濾、稀釋,濾液經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化,黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上,此抗體對黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專一性,用水將免疫親和柱上雜質(zhì)除去,以甲醇通過免疫親和柱洗脫,再經(jīng)光化學衍生器柱后衍生,以提高檢測準確性。

【主要試劑及耗材】:

ToxinFast®氣控操作架:含氣泵

ToxinFast®黃曲霉毒素免疫親和柱1ml3ml

ToxinFast®光化學衍生器

ToxinFast®玻璃微纖維濾紙 :直徑11cm、孔徑1.5µm

ToxinFast®玻璃試管:直徑12mm,長75mm,無熒光特性

ToxinFast®注射器:10ml、20ml

【檢測步驟】:

    樣品粉碎——提取——洗脫液進樣、親和柱凈化——化學衍生——檢測數(shù)值(做過液相的都知道這些步驟的,在這里就簡單提一下,主要是為什么用到氣控操作架和化學衍生器在下面解釋一下!)

氣控操作架的使用說明:

    在樣品粉碎后需要過親和柱凈化,也就是怎么方便親和柱使用操作的問題,氣控操作架能有效地提高這個環(huán)節(jié)的工作效率(很方便操作的),如圖示:

1 連接組裝好的氣控操作架,將免疫親和柱、注射器針筒與氣控操作架連接,如圖所示;

   

 

將處理后的溶液上樣;

 

調(diào)節(jié)空氣泵旋鈕以控制流速,使樣液以1-2d/s的速度流出;

4,待樣液完全排干,用去離子水或蒸餾水以2-3d/s的流速洗滌兩次,每次10ml;

5,待液體完全排干,將樣品瓶置于親和柱下方,上樣1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。

以上操作步驟是用免疫親和柱--高效液相法檢測中藥中黃曲霉毒素的必經(jīng)步驟,如使用氣控操作架就能很好的固定親和柱并以可控流速操作,既高效也能使操作誤差減到最小。

華安麥科ToxinFast®氣控操作架具有6支可控支流,能同時有效檢測多個樣本,還適用于

1ml和3ml多種規(guī)格免疫親和柱。

為什么使用光化學衍生器?

    由于黃曲霉具有較強的紫外吸收和產(chǎn)生熒光的特性,因此可以進行HPLC-紫外或熒光檢測,但是同時黃曲霉毒素中的B1、G1由于其在含水的流動相中容易產(chǎn)生熒光淬滅,因此在很多的實驗中都會采用衍生法測定黃曲霉毒素。

衍生的方法也很多:有柱前的,柱后的,在線的,由于在線的柱后光化學衍生有明顯的優(yōu)勢,所以現(xiàn)在被增補為藥典的檢測方法,優(yōu)勢主要在于(無需任何化學試劑、對人員無傷害;無需人員直接操作、避免誤差; 無需擔心衍生液腐蝕檢測器

 

 

大家看完上圖肯定也能感受到在線光化學衍生的效果,希望這個分享可以給大家做黃曲霉毒素檢測時提供小小的幫助。

 
編輯:songjiajie2010

 
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